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合成siRNA定量试剂盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

合成siRNA定量试剂盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6142 Synthetic siRNA Quantitation Core Kit 30 Rxns ￥5,112 合成siRNA定量试剂盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit 合成siRNA定量试剂盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit 合成siRNA定量试剂盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit
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■ 制品内容 (30次量)*1
1. Terminal Transferase Buffer 390 μl
2. Terminal Transferase 30 μl
3. dATP 150 μl
4. Recombinant RNase Inhibitor 30 μl
5. Oligo dT Primer*2 150 μl
6. RT Buffer 270 μl
7. RT Enzyme Mix 30 μl
8. Universal Primer (10 μM) 120 μl
9. EASY Dilution (for Real Time PCR) 1 ml
10. Control siRNA (20 nM) 10 μl
11. Control Primer (10 μM) 20 μl
*1 含 poly dA 加尾反应及反转录反应 30 次反应量、Real Time PCR用Universal Primer 120 次反应量。
*2 本制品专用Oligo dT Primer。
 
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 制品说明
在动物或细胞中siRNA对特定基因敲除效果的验证，在医药领域被广泛应用。
本制品是对合成siRNA进行定量的试剂盒，通过Real Time PCR解析方法，对细胞、组织、血液等提取的Total RNA样品中siRNA的残余量进行测定。
siRNA化学合成时一般在3’末端带有两个脱氧胸腺嘧啶(dT)碱基。本试剂盒在3’末端(dT)加上poly(A)尾，再利用特别设计的Oligo dT Primer进行反转录反应，即使在Total RNA存在的条件下也能制备与siRNA互补的cDNA。以合成的cDNA为模板，利用TB Green® Premix Ex Taq Ⅱ (Tli RNaseH Plus)等试剂盒中的嵌合法进行Real Time PCR，对合成的siRNA进行高灵敏度的定量。
注意：1. 本试剂盒应用于3’末端带有脱氧胸腺嘧啶d(TT)的siRNA的定量。
2. 合成的siRNA 3’末端两个(dT)碱基以外带有DNA序列时，可以通过更改Oligo dT Primer序列，使用本试剂盒。
3. 合成的siRNA 3’末端没有添加(dT)碱基或者3’末端为RNA时，不能使用本试剂盒。
 
■ 实验例
小鼠血液中合成siRNA的定量模拟实验
【 方法 】
在50 μl小鼠全血(柠檬酸钠抗凝剂)中分别添加10 amol、1 fmol、100 fmol的Control siRNA后，使用RNAiso Plus(Code No.: 9108)及Dr. GenTLE Precipitation Carrier(Code No.: 9094)制备Total RNA(50 μl)。
使用本制品和TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time) 进行Real Time PCR反应，对Control siRNA进行定量检测。
【 结果 】
使用本制品，通过Real Time PCR解析方法，对于添加到小鼠血液中的siRNA进行了定量。
合成siRNA定量试剂盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit
图. 小鼠血液样品中掺入的Control siRNA定量结果
 
 

页面更新：2024-04-01 16:27:07

3’-RACE试剂盒3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase酶试剂盒Takara Clontech

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3’-RACE试剂盒3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6106 3′-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase 20 Rxns ￥1,950 3’-RACE试剂盒3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase 3’-RACE试剂盒3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase 3’-RACE试剂盒3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase
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■ 制品内容 (20 次量)
制品内容1～9项为用于3’RACE实验的反转录用试剂，可用于20次反转录反应 (约100次3’RACE PCR反应)；10～12为Control实验用试剂，可进行5次Control实验。
1. PrimeScript RTase (200 U/μl) 10 μl
2. RNase Inhibitor(40 U/μl) 10 μl
3. 5 × PrimeScript Buffer 40 μl
4. dNTP Mixture (10 mM each) 20 μl
5. 3’RACE Adaptor (5 μM) 20 μl
6. RNase Free dH2O 1 ml
7. 1 × cDNA Dilution Buffer II 1 ml
8. 3’RACE Outer Primer (10 μM ) 200 μl
9. 3’RACE Inner Primer (10 μM ) 200 μl
10. Control HL60 Total RNA (500 ng/μl)* 10 μl
11. 3’RACE Control Outer Primer (10 μM)* 10 μl
12. 3’RACE Control Inner Primer (10 μM)* 10 μl
   
* 用于扩增Human Prohibitin (PHB) 基因。
 
■ 制品说明
本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3’末端全长的试剂盒。对RNA结构进行分析时，一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的DNA片段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDNA片段，然而在基因工程研究中，分析遗传基因的全长cDNA序列又是十分重要的。RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 法能有效地解决这一问题。3’-Full RACE Core Set with PrimeScript RTase能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3’末端的全长序列。
本试剂盒中含有完成3’-RACE操作的主要试剂。试剂盒中使用的PrimeScript Reverse Transcriptase经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。结合使用TaKaRa LA Taq (Code No.: RR002A) 进行PCR扩增时，其3’RACE的扩增性能大大优于其他同类产品。 本试剂盒应用了套式PCR原理，增加了PCR扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行3’RACE实验，并且对长片段的3’RACE扩增具有明显优势，我们曾经使用本试剂盒成功扩增了8 kb的3’RACE DNA片段。使用TaKaRa LA Taq™ 扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基，其产物可直接克隆于T-Vector中。反转录引物3’RACE Adaptor Primer含有由Takara特别设计的dT区域，反转录效率高。3’RACE Inner Primer中含有BamH I酶切位点，为克隆实验提供了方便。制品中的Control RNA及Control Primer可以用于Control实验。
 
■ 各种引物的序列
引物名称 引物序列 (5’→3’)
   3’RACE Adaptor    含有由Takara特别设计的dT区域及Adaptor Primer部分
   3’RACE Outer Primer    TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT
   3’RACE Inner Primer    CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG
   3’RACE Control Outer Primer    GAGTGCAGGACATTGTGGTAGGG
   3’RACE Control Inner Primer    ATCTTTGACTGCCGTTCTCGACC
 
 
■ 试剂盒原理
进行3’RACE 实验时，首先由PrimeScript Reverse Transcriptase将Poly(A)+RNA反转录成cDNA，然后再使用TaKaRa LA Taq (Code No.: RR002A)，以反转录的cDNA为模板，进行套式PCR反应。3’RACE Adaptor Primer作为反转录引物用于cDNA合成 (具体原理见图1)。
 
3’-RACE试剂盒3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase
图1. 3’-Full RACE Core Set with PrimeScript RTase的实验原理图
 
1. 以Total RNA为模板，使用3’RACE Adaptor引物进行反转录反应，合成1st Strand cDNA。
2. 使用上游外侧特异性引物 (GSP1) 和3’RACE Outer Primer进行1st PCR反应。如果1st PCR反应未能得到目的产物，再使用上游内侧特异性引物 (GSP2) 和3’RACE Inner Primer进行2nd PCR反应。
3. PCR产物可以直接进行DNA测序或TA克隆。如果使用含有BamH I酶切位点的上游内侧特异性引物进行2nd PCR扩增时，可以使用限制酶 (BamH I) 对PCR产物进行酶切反应，然后克隆至相关的载体中。
 
■ 注意事项
1. 同时需要进行数次反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等)，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡，分取之前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 为了防止Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室建议保存于-70℃至-80℃。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
 
 

页面更新：2024-01-25 15:06:08

Cycling探针检测试剂盒CycleavePCR™ Core Kit酶试剂盒Takara Clontech

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Cycling探针检测试剂盒CycleavePCR™ Core Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara CY501 CycleavePCR™ Core Kit 50 Rxns ￥907 Cycling探针检测试剂盒CycleavePCR™ Core Kit Cycling探针检测试剂盒CycleavePCR™ Core Kit Cycling探针检测试剂盒CycleavePCR™ Core Kit
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■ 制品内容 (25 μl反应×50次量)
10×CycleavePCR Buffer 125 μl
dNTP Mixture (各2.5 mM) 150 μl
Mg Solution (25 mM) 250 μl
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 12.5 μl
Tli RNase H Ⅱ(200 U/μl) 25 μl
Positive Control (104 copies/μl)*1 10 μl
Positive Control Primer Mix (各10 μM) 10 μl
Positive Control Probe (FAM标记)*2 (25×) 10 μl
dH2O 700 μl
 
*1 Positive Control是质粒，拷贝数由OD260简单换算得到，不是实际拷贝数。
*2 Positive Control用探针，请避光保存。
 
 
■ 制品说明
CycleavePCR Core Kit是采用Cycling Probe法进行Real Time PCR反应的专用试剂盒。该方法不仅秉承了Real Time PCR法的快速性、定量性等特点，而且还具有检出特异性高的优势。使用该方法能够简单、准确地对目的基因进行定性、定量分析及进行SNP分型解析等。使用Smart Cycler System 或Smart Cycler II System (Cepheid) 等仪器进行实验时可使用本产品。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 试剂盒特长
1. 由Real Time PCR和Cycling探针法相结合，可以迅速准确地获得检测结果。该检出方法是一种即使有一个碱基不同也能识别的高特异性检出方法。
2. DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS，可以进行Hot Start法PCR反应，具有扩增效率高、扩增灵敏度好、扩增特异性强的特点。
 
■ 注意事项
1. 当同时需要进行多个PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 （Master Mix；其中包括dH2O、Buffer、酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用TaKaRa Ex Taq HS，Tli RNaseH Ⅱ等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部。其中含有50%的甘油，操作时需轻轻吹吸混匀。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
 
 

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