DNA Polymerase I 在模板和引物 (DNA或RNA) 存在的条件下，以dNTP作底物，沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本酶分子量约为109,000，具有双链特异性的5′→3′外切核酸酶活性以及单链特异性的3′→5′外切核酸酶的活性。本酶是由带有编码E.coli DNA Polymerase I基因的大肠杆菌精制而成的。
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■ 起源
Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I.
■ 活性定义
以合成的Poly d (A-T) DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10 nmol 的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。
■ 用途
1. 与DNase I (Code No. 2270A/B) 一起使用，进行切口平移 (Nick translation)。 2. 通过Okayama-Berg法合成cDNA的第二条链 (0.3 μg DNA Polymerase I 约为2.5 units)。
本公司生产的Pfu DNA Ploymerase是从克隆有Pyrococcusfuriosis DNA Ploymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为90kDa。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正DNA扩增过程中产生的错配，而传统的Taq酶却不能，其它耐热DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等虽具有校正功能，但Pfu酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase中出错率最低的。Pfu酶无5’→3’核酸外切酶活性，PCR反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/分钟，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍保持90%以上的活性，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu酶的PCR产物为平末端，可加A处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。一般用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和末端补平等。
本公司生产的Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermusaquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为94 KD。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和5’→3’核酸外切酶活性，无3’→5’核酸外切酶活性。在PCR反应中，该酶的延伸速度为1-2kb/分钟，PCR产物3’端带A，可直接用于T/A载体克隆。该酶无外源核酸酶和细菌基因组DNA污染，稳定性好，特异性强，一般用于小于6kb的对保真度要求不高的DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等。
本酶催化在各种多聚核糖核酸的3′末端聚合A碱基的反应。反应中使酶达到高活性所需的盐浓度为300-400 mM NaCl。能以多种单链RNA作引物，双链RNA以及合成的多聚核苷酸、短的寡聚核苷酸等不宜作引物；DNA也不能作引物。本酶因聚合AMP碱基，故只能用ATP作底物，ADP、dATP均不能作为底物。另外，UTP、CTP的掺入不足ATP的5%，而GTP也不能作为底物进行聚合。
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■ ATP的掺入个数和时间的关系
以1 mM ATP作底物，15 U的Poly(A) Polymerase作用于84 μg RNA所得到的结果如下：
MightyAmp DNA Polymerase是追求高反应性能开发的PCR酶，由于本酶具有很强的扩增性能，对于使用普通PCR酶难以扩增的样品，也显示出很好的扩增能力，如含有大量PCR阻害物的生体粗提样品。 MightyAmp DNA Polymerase Ver.3是对MightyAmp DNA Polymerase进行了改良，与Ver.2相比，这种改良后的PCR酶和Buffer组合使用，可进一步增强对PCR阻害物的抵抗性。此外，也提高了血液、动植物组织等生物体样品直接加入到反应液中的Direct PCR的反应性能。 无论是PCR阻害物含量较多的粗提样品，还是GC Rich、AT Rich的模板均可在宽广的模板范围内进行有效扩增，并根据需要将试剂盒中附带的10×Additive for High Specificity添加到PCR反应液中可提高PCR扩增的特异性和检测灵敏度。 本酶是使用单克隆抗体的Hot Start型PCR扩增用DNA聚合酶，98℃高温加热前，抗体与酶结合，有效抑制聚合酶活性。
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■ 注意事项：
1. 先使用不含10×Additive for High Specificity的反应体系进行PCR扩增。想进一步提高扩增特异性和检测灵敏度时再添加10×Additive for High Specificity进行PCR扩增。 2. 动物组织进行Direct PCR的扩增产物电泳时，建议在Loading Buffer中添加Proteinase K。
