使用膜再生液可以对同一张膜进行多次 Western Blot 检测。在室温条件下，将用过的膜浸泡在膜再生液 10-60 分钟，可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后，可以使用不同的抗体进行下一轮 Western Blot 实验。适宜从少量样品多次检测不同蛋白质。即使样品量并不匮乏，采用这一策略多次检测同一 张膜上的蛋白，能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。而且可以消除重新上样而带来的误差， 使可比性更强。 Western Blot

膜再生液特点是：

无毒无味无害，室温下使用，室温下保存；可对同一张膜进行 5 次以上的 Western Blot 检测。

适用：清除硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上结合的抗体，不影响抗原蛋白。

使用方法：

1. 将膜充分浸泡于适当体积的再生液中，室温洗脱10-20分钟，时间长短应该参考注意事项进行优化，洗脱某些抗体需较长时间，更有长达60分钟之久，如果室温洗脱效果不好，可将膜再生液加热至50度，在50度水浴条件下进行洗脱。

2. 取出膜，用洗涤液（如 TBST 等）漂洗两次。

3. 此时膜上抗体已除去，可重新封闭后再加入另一种抗体进行检测。

注意事项： 1. 膜再生液实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下将抗体洗脱下来，实际操作中，膜类型、抗体类型、 浓度及抗原特性都影响洗脱难易度。

2. 适用于 ECL 和类似的化学发光试剂进行的 Western 检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western 检测，例如 DAB，NBT/BCIP。

3. 用 ECL 显色后，再生液洗脱几分钟后，可再次加入 ECL 显色液显影，如胶片上显示条带，表明抗体 未除净，须进一步在再生液中浸泡，至胶片上无显色。

4. 使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用 BSA 封闭的膜更容易再生。

5. 尽量避免让膜干燥。

相关产品：

PR1800 Western blotting 蛋白 MARKER

PE0010 ECL Plus 荧光检测试剂(ECL 超敏发光液)

A1010 30%丙烯酰胺 (29:1)

P1015 4×蛋白上样缓冲液（含 DTT）

T1080 20×TBS