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三维培养细胞活性及毒性检测

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三维培养细胞活性及毒性检测

细胞培养于悬滴(hanging drop), 自组装形成球状细胞簇。 Cayman采用3D Biomatrix公司的3D细胞培养平台，开发出了两款全新的试剂盒用于研究Perfecta3D®培养板上的球状体(spheroid)细胞。即Perfecta3D®细胞活力检测试剂盒及Perfecta3D®细胞毒性检测试剂盒，可快速精准的检测球状体的一些基本细胞过程。
 
研究复杂的细胞和组织，及其信号传导与调控可不是件容易事。而模拟细胞或组织环境，建立最接近体内天然条件的实验系统同样困难。这就是3D细胞培养所面临的挑战，3D培养系统旨在更好的模拟细胞的体内生长环境。近来越来越多的证据表明，3D细胞培养系统比传统2D培养系统更贴近体内的生理条件。美国3DBiomatrix公司生产的Perfecta3D®悬滴板是一个新的三维细胞培养平台，能够在多孔板模式中形成大小均匀的球状体悬滴；这种悬滴是细胞自组装形成的球状细胞簇，是三维（3D）细胞培养和筛选中研究的最有利的模型之一。同其他类型的3D支架和水凝胶等方法相比，这种球状体具有简单性，可重复性以及生理组织的相似性，能模拟组织肿瘤固有的代谢（氧气、二氧化碳、养分、废物）和增殖梯度变化。作为优良的生理肿瘤模型可以提供比2D细胞培养更可靠的结果。
 三维培养细胞活性及毒性检测

图1. Perfecta3D®悬滴培养板促进细胞球体在悬滴中的培养。用移液器将细胞悬液加入每个孔，细胞自组装形成的球状细胞簇。

应用一. 细胞活性检测

 在细胞研究中，对细胞活性及细胞毒理的检测是一项基本的细胞学技术，通常采用WST-1法。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的可溶性formazan盐。Formazan产物的吸光度与活细胞的数量及活性成正比。
 
Cayman开发的Perfecta3D®细胞活力检测试剂盒（产品编号：600990）, 提供3D细胞培养板、WST-1试剂、电子媒介体溶液（Electron Mediator Solution）以及分析用的圆底板。如图2所示，HEK293细胞以不同细胞密度培养于悬滴中，设置Vehicle对照以及逐渐增加Triton X-100浓度的实验组（处理1小时）。然后转移细胞至圆底板，与WST-1溶液孵育，最后在450nm读数。OD值随细胞数升高，随Triton X-100浓度的升高而降低。

 三维培养细胞活性及毒性检测

图2. 起始细胞数量对450nm吸光度的影响。HEK293细胞以不同起始细胞密度加入3D培养板，将培养板移入37度CO2孵育箱中。4天后，细胞经Vehicle, 0.001%或0.01% Triton X-100处理1小时，然后转移至圆底板，每孔加入WST-1试剂。细胞于37度孵育3.5小时后，于450nm测定吸光度。

应用二. 细胞毒性检测 

细胞膜完整性的丧失是细胞毒性的表现形式之一，导致细胞的渗漏。LDH是一个可溶性的胞浆酶，可从受损细胞释放到培养基中，因此被用作细胞溶解、细胞毒性以及细胞活性等的标志分子。Cayman开发的Perfecta3D®细胞毒性检测试剂盒（产品编号：601050）提供3D细胞培养板以及检测LDH的必需试剂。细胞培养于悬滴中，通常含40-50ul的培养基，如要处理细胞，可移出10ul培养基，加入含有测试化合物的替换培养基。进行细胞毒性检测时，可移出10ul培养基，然后将细胞转移至标准的96孔板，用LDH试剂进行检测。490nm读数，吸光度与LDH浓度线性相关（图3）。
 

图3. LDH标准曲线。LDH标准品溶于不含FBS的RPMI 1640中，然后每孔加入100ul的反应液，室温孵育30分钟。

土壤过氧化氢酶（S-CAT）活性检测试剂盒 分光法

发表于由

土壤过氧化氢酶（S-CAT）活性检测试剂盒 分光法

货号：BL885A

规格：24T

品牌：Jinpan

土壤过氧化氢酶（S-CAT）活性检测试剂盒

产品编号

产品名称

规格

BL885A

土壤过氧化氢酶（S-CAT）活性检测试剂盒

24T

 

产品简介：

土壤过氧化氢酶（S-CAT）是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用，降低土壤中过度累积的过氧化氢对植物根系的危害。本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，即CAT催化过氧化氢产生水与氧气，剩余的过氧化氢与一种高灵敏显色探针反应生成有色物质，其在510nm左右有最大吸收峰。通过过氧化氢的减少量来计算土壤中CAT 酶的活力。

本试剂盒突出特点是从紫外波长（240nm：过氧化氢的检测波长）转换到可见波长（510nm）检测，无需使用石英比色皿或UV板。而且由于过氧化氢极其不稳定，直接检测造成读值不稳定，且蛋白质等组分在此紫外波长下也有光吸收，影响结果精确性。

 

产品组成:

试剂名称

规格

试剂一

液体×1支

试剂二

液体6mL×1支

试剂三

液体50mL×1瓶

试剂四

液体8mL×1瓶

标准品

液体1mL×1支

 

注意事项：

1.  本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

2.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件：

4℃保存三个月。

货号 BL885A
规格 24T
品牌 Jinpan
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Curcumin 姜黄素

发表于由

Curcumin 姜黄素

货号：
IC0610

品牌：
Jinpan

Curcumin 姜黄素

暂无详情
产品简介
EC EINECS 207-280-5
MDL MFCD00008365
别名 1,7-双(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮; ?天然黄3
CAS 458-37-7
分子式 C21H20O6
分子量 368.38
纯度 HPLC≥98%
单位 瓶
生物活性 Curcumin是一种天然酚类化合物，具有抗炎，抗氧化，抗增殖和抗血管生成等多种活性。 Curcumin是p300组蛋白乙酰转移酶 ((HATs)) 抑制剂，也显示对 NF-κB 和MAPKs 的抑制作用。[1-6]
In Vitro 姜黄素部分通过激活核因子（红细胞-2相关）因子2（Nrf2）及其抗氧化剂和II期解毒酶发挥其化学预防作用[1]。姜黄素抑制T47D细胞生长，分别为24,48和72小时MTT测定的IC50为25,19和17.5μM。姜黄素和水飞蓟宾混合物对T47D细胞的IC50分别为17.5,15和12μM，暴露时间分别为24,48和72小时[2]。姜黄素（2.5-80μM）诱导AGS和HT-29细胞系中的凋亡细胞死亡，并且在AGS和HT-29细胞系中IC50分别为21.9±0.1,40.7±0.5μM。姜黄素诱导的细胞凋亡需要AGS和HT-29细胞中的半胱天冬酶活性。姜黄素诱导ER Ca2 +下降和线粒体Ca2 +超载[3]。姜黄素以剂量依赖性方式诱导LNCaP和PC-3细胞的G2/M细胞周期停滞。姜黄素上调NF-κB抑制剂IkappaBalpha的蛋白质水平，下调c-Jun和AR的蛋白质水平[5]。
In Vivo 与暴露于CMS的大鼠相比，姜黄素（10mg/kg，po）显著地防止了蔗糖消耗百分比的降低。姜黄素治疗可显著预防应激大鼠TNF-α和IL-6水平的升高[4]。姜黄素以20mg/kg（ip）降低p300/CREB结合蛋白（CBP）在脑源性神经营养因子（BDNF）启动子上的结合，降低40mg/kg的BDNF启动子处P300/CBP的结合，和在慢性压迫性损伤（CCI）大鼠中，在60mg/kg的BDNF启动子处，p300/CBP和H3K9ac/H4K5ac的所有四种蛋白质均降低[6]。
SMILES O=C(CC(/C=C/C1=CC=C(O)C(OC)=C1)=O)/C=C/C2=CC=C(O)C(OC)=C2
靶点 Histone Acetyltransferase; Epigenetic Reader Domain; Keap1-Nrf2; Autophagy;Mitophagy; Ferroptosis
动物实验 将新鲜悬浮于盐水中的姜黄素（10mg/kg）通过口服强饲法每天一次施用，持续3周。将40只大鼠随机分为4组（n = 10 /每组）：组I接受生理盐水作为对照，组II接受姜黄素，组III接受CMS和接受盐水，组IV接受CMS和接受姜黄素。
细胞实验 T47D乳腺癌细胞系在补充有10％FBS，2mg/mL碳酸氢钠，0.05mg/mL青霉素G，0.08mg/mL链霉素的RPMI 1640中生长。将培养物保持在塑料烧瓶上并在37℃，5％CO 2中温育。在培养足够量的细胞后，通过24,48和72小时MTT测定研究水飞蓟宾和姜黄素的细胞毒性作用，其中在96孔板中培养1000个细胞/孔。在37°C和含5％CO2的潮湿气氛中孵育24小时后，用连续浓度的姜黄素（5,10,20,30,40,50,60,80,100μM），水飞蓟宾（20， 40,60,80,100,120,140,180,200μM）和姜黄素 – 水飞蓟宾混合物（每种都有5,10,20,30,40,50,60,80,100μM）24,48除了含有200μL含有10％DMSO的培养基的细胞用于对照之外，以一式四份的方式72小时和72小时。温育后，将平板的所有孔的培养基更换为新鲜培养基，并将细胞在培养箱中放置24小时。然后，小心地除去所有孔的培养基，并向每个孔中加入溶解在PBS中的50μL2mg/ mL MTT，并用铝箔覆盖该板并再次温育4.5小时。除去孔的内容物后，向孔中加入200μL纯DMSO。然后，加入25μLSorensen的甘氨酸缓冲液，并使用参考波长为630nm的EL×800微孔板吸光度读数器在570nm读取每个孔的吸光度。
数据来源文献 [1]. Gao S, et al. Curcumin attenuates arsenic-induced hepatic injuries and oxidative stress in experimental mice through activation of Nrf2 pathway, promotion of arsenic methylation and urinary excretion. Food Chem Toxicol. 2013 Jul 18. pii: S0278-6915(13)004
[2]. Nasiri M, et al. Curcumin and Silibinin Inhibit Telomerase Expression in T47D Human Breast Cancer Cells. Asian Pac J Cancer Prev. 2013;14(6):3449-53.
[3]. Cao A, et all. Curcumin induces apoptosis in human gastric carcinoma AGS cells and colon carcinoma HT-29 cells through mitochondrial dysfunction and endoplasmic reticulum stress. Apoptosis. 2013 Jul 24. [Epub ahead of print]
[4]. Jiang H, et al. Antidepressant-like effects of curcumin in chronic mild stress of rats: Involvement of its anti-inflammatory action. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2013 Jul 20. pii: S0278-5846(13)00150-4.
[5]. Guo H, et al. Curcumin induces cell cycle arrest and apoptosis of prostate cancer cells by regulating the expression of IkappaBalpha, c-Jun and androgen receptor. Pharmazie. 2013 Jun;68(6):431-4.
[6]. Zhu X, et al. Curcumin alleviates neuropathic pain by inhibiting p300/CBP histone acetyltransferase activity-regulated expression of BDNF and cox-2 in a rat model. PLoS One. 2014 Mar 6;9(3):e91303.
规格 10mg 10mM*1mL (in DMSO) 50mg

研究表明，姜黄素具有抗肿瘤、抗炎、利胆、抗氧化等活性，是乙酰转移酶p300/CREB结合蛋白特异性抑制剂，还可以抑制组蛋白/非组蛋白的乙酰化和组蛋白乙酰转移酶依赖的染色质转录，激活Nrf2 pathway并抑制NF-κB的激活。

Koumine；钩吻素子

发表于由

Koumine；钩吻素子

货号：
IK0120

品牌：
Jinpan

Koumine；钩吻素子

暂无详情
产品简介
MDL MFCD11111448
别名 阔胺
英文名称 Koumine
CAS 1358-76-5
分子式 C20H22N2O
分子量 306.41
纯度 HPLC≥98%
单位 瓶
生物活性 Koumine 具有高效抗肿瘤活性，在肿瘤细胞中能够增加 Bax/Bcl-2 的蛋白比例和 caspase-3 的表达[1]。Koumine 具有抗焦虑、抗应激、抗银屑病和镇痛活性[3]。在类风湿性关节炎动物模型中，Koumine 能够预防关节炎的发展[2]。
In Vitro Koumine（25,50,100和200μM）降低LPS诱导的BV2细胞中小胶质细胞M1极化因子的蛋白质和mRNA水平[3]。Koumine（0.5,1和2 mg/mL）剂量和时间依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖，在72小时时IC50为124μg/ mL。 Koumine诱导细胞凋亡，导致细胞周期停滞在G2/M期[1]。 Koumine（0.5,1和2 mg/mL）在MCF-7细胞中以剂量依赖性方式上调Bax/Bcl-2比率和caspase-3表达[1]。
In Vivo Koumine的毒性较小，Wistar大鼠的半数致死量（LD50）为300.0 mg/kg。 Koumine（0.6,3或15 mg/kg/per，po）在佐剂诱导的关节炎（AIA）和胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠中表现出抗风湿作用[2]。 Koumine抑制15 mg/kg血清中关节组织中细胞因子和TNF-α水平的增加，并抑制IL-1β在3和15 mg/kg时血清水平的升高[2]。 Koumine（0.28,7 mg/kg，sc）显著降低神经损伤后的神经性疼痛。 Koumine抑制Iba-1蛋白水平升高[3]。
SMILES C=C[C@]12[C@]3([H])C[C@@H]4C5=NC6=CC=CC=C6[C@@]51C[C@H](N(C)C2)[C@@]3([H])CO4
靶点 Others
数据来源文献 [1]. Zhang X, et al. Apoptotic Effect of Koumine on Human Breast Cancer Cells and the Mechanism Involved. Cell Biochem Biophys. 2015 Jun;72(2):411-6.
[2]. Yang J, et al. Effects of Koumine on Adjuvant- and Collagen-Induced Arthritis in Rats. J Nat Prod. 2016 Oct 28;79(10):2635-2643.
[3]. Jin GL, et al. Koumine Attenuates Neuroglia Activation and Inflammatory Response to Neuropathic Pain. Neural Plast. 2018 Mar 25;2018:9347696.
规格 5mg 10mM*1mL in DMSO 10mg 20mg

Koumine 是钩吻 (Gelsemium elegans) 中的生物碱，具有高效抗肿瘤活性。

Mdivi-1

发表于由

Mdivi-1

货号：
IM2550

品牌：
Jinpan

Mdivi-1

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产品简介
MDL MFCD00974506
别名 3-(2,4-二氯-5-甲氧基苯基)-2,3-二氢-2-硫代-4(1H)-喹唑啉酮
英文名称 Mdivi-1
CAS 338967-87-6
分子式 C15H10Cl2N2O2S
分子量 353.22
储存条件 -20度
纯度 ≥98%
单位 瓶
生物活性 Mdivi-1是选择性的发动蛋白相关蛋白1 (Drp1) 抑制剂。Mdivi-1以剂量依赖性方式抑制Dnm1 GTP酶活性，估计EC50为1-10μM。[1-4]
In Vitro 用mdivi-1处理的细胞显示细胞色素c释放减少，细胞凋亡诱导后表面磷脂酰丝氨酸暴露率降低，与细胞凋亡的抑制一致，以及之前的研究使用其他策略来破坏DRP1活性[2]。 Mdivi-1导致缺血性视网膜中的凋亡细胞死亡[3]。
In Vivo 线粒体分裂DRP，Dnm1，是体内mdivi-1的靶标。 Mdivi-1定量阻断GMPPCP依赖性Dnm1自组装，其浓度范围与其对体内线粒体分裂的影响相似[1]。 Mdivi-1（50 mg/kg，ip）显著降低正常小鼠视网膜中GFAP蛋白的表达[3]。
激酶实验 所有GTP酶测定反应均在200μL体积中开始，其中将150μL置于96孔板的孔中。通过读取反应的A340监测的NADH的消耗，使用SpectraMAX 250 96孔板读数器每20秒测量总共40分钟。将分光光度数据转移至Excel，并将测得的NADH稳态耗尽随时间转化为蛋白质活性。
SMILES O=C1N(C2=C(Cl)C=C(Cl)C(OC)=C2)C(S)=NC3=C1C=CC=C3
靶点 Dynamin
细胞实验 YPGlycerol板顶部装有10mL含有1％低熔点琼脂和75μMmdivi-1的YP甘油，12小时后使用48孔钉扎装置点样细胞。钉住细胞后，将板在24℃或37℃温育，并使用Eagle Eye II成像系统成像。
数据来源文献 [1]. Cassidy-Stone A, et al. Chemical inhibition of the mitochondrial division dynamin reveals its role in Bax/Bak-dependent mitochondrial outer membrane permeabilization. Dev Cell. 2008 Feb;14(2):193-204.
[2]. Tanaka A, et al. A chemical inhibitor of DRP1 uncouples mitochondrial fission and apoptosis. Mol Cell. 2008 Feb 29;29(4):409-10.
[3]. Park SW, et al. A selective inhibitor of drp1, mdivi-1, increases retinal ganglion cell survival in acute ischemic mouse retina. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2011 Apr 27;52(5):2837-43.
[4]. Zhou K, et al. RIP1-RIP3-DRP1 pathway regulates NLRP3 inflammasome activation following subarachnoid hemorrhage. Exp Neurol. 2017 Sep;295:116-124.
规格 10mg 20mg

Mdivi-1是一个具有选择性和细胞穿膜性的线粒体分裂抑制剂。

Lenalidomide；来那度胺

发表于由

Lenalidomide；来那度胺

货号：
IL0740

品牌：
Jinpan

Lenalidomide；来那度胺

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产品简介
MDL MFCD07772307
EC EINECS 691-297-1
别名 Leflunomidum;HWA486
英文名称 Lenalidomide
CAS 191732-72-6
分子式 C13H13N3O3
分子量 259.26
纯度 HPLC≥98%
单位 瓶
生物活性 Lenalidomide是用作免疫调节药物的 TNF-α 抑制剂。它还具有抗血管生成活性。[1-6]
In Vitro 来那度胺在刺激T细胞增殖和IFN-γ和IL-2产生方面是有效的。来那度胺已被证明可抑制促炎性细胞因子TNF-α，IL-1，IL-6，IL-12的产生，并提高人PBMC中抗炎细胞因子IL-10的产生。来那度胺可直接下调IL-6的产生，也可通过抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞和骨髓基质细胞（BMSC）相互作用来增加骨髓瘤细胞的凋亡[2]。用沙利度胺，来那度胺和Pomalidomide观察剂量依赖性与CRBN-DDB1复合物的相互作用，IC50值分别为~30μM，~3μM和~3μM，这些CRBN表达细胞减少（U266-CRBN60和U266-CRBN75） ）对于抗增殖作用，Lenalidomide的反应性反应范围为0.01至10μM，对亲代细胞的反应性较低[3]。来那度胺，一种沙利度胺类似物，作为人类E3泛素连接酶脑和CKIα之间的分子胶，可以诱导该激酶的泛素化和降解，因此可能通过p53激活杀死白血病细胞[5]。
In Vivo 通过IV，IP和PO给药途径，来那度胺的毒性剂量高达15,22.5和45mg/kg。由于在我们的PBS给药载体中的溶解度有限，这些最大可达到的来那度胺剂量具有良好的耐受性，除了在15mg/kg IV剂量下一只小鼠死亡（总共四次给药）。值得注意的是，在IV剂量15 mg/kg（n = 3）或10 mg/kg（n = 45）或任何其他剂量水平的IV，IP和PO途径中，没有观察到其他毒性[4] 。
SMILES O=C1C2=CC=CC(N)=C2CN1C(C(N3)=O)CCC3=O
靶点 TNF-α;Ligand for E3 Ligase
动物实验 小鼠[4]使用8-10周龄的印迹对照区（ICR）小鼠。来那度胺在含有1％HCl的PBS中不完全溶解于3.5mg/mL及以上，因为在彻底混合后仍留下可见颗粒。因此，选择3mg/mL作为最大剂量溶液浓度（没有可见颗粒）。单个，单个小鼠最初给予3,10或15mg/kg IV; 4.5,15或22.5 mg/kg IP;和9,30或45毫克/千克PO。然后以Lenalidomide在给药溶液中的体积和溶解度可达到的最大剂量评估另外的小鼠（n = 4）。密切监测所有小鼠1小时，并在给药后3,6和24小时重新评估毒性[4]。
细胞实验 细胞系NCI-H929和U266以及DF15细胞在含有补充有2mM谷氨酰胺的10％（V/V）热灭活的胎牛血清的RPMI-I640培养基中生长。为了产生来那度胺抗性细胞系，连续处理NCI-H929细胞（每3-4天加入新鲜的来那度胺），对照（最终0.1％DMSO）或低剂量来那度胺（1μM）2个月，直至细胞增殖。通过细胞活力（Vi-细胞XR细胞活力分析仪）测定，来那度胺（1μM）不再抑制，通过流式细胞术和细胞周期分析（碘化丙锭染色）进行细胞增殖。在获得1μM的抗性后，用来那度胺（10μM）处理抗性H929细胞系另外4个月。在这段时间之后，细胞培养物达到完全建立对高剂量来那度胺（30μM）的抗性。在此处描述的实验之前，将H929来那度胺抗性细胞在使用前从化合物中取出5-7天[3]。
数据来源文献 [1]. Omran A, et al. Effects of MRP8, LPS, and lenalidomide on the expressions of TNF-α , brain-enriched, and inflammation-related microRNAs in the primary astrocyte culture. ScientificWorldJournal. 2013 Sep 21;2013:208309.

[2]. Kotla V, et al. Mechanism of action of lenalidomide in hematological malignancies. J Hematol Oncol. 2009 Aug 12;2:36.

[3]. Lopez-Girona A, et al. Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide. Leukemia. 2012 Nov;26(11):2326-35.

[4]. Rozewski DM, et al. Pharmacokinetics and tissue disposition of lenalidomide in mice. AAPS J. 2012 Dec;14(4):872-82.

[5]. Minzel W, et al. Small Molecules Co-targeting CKIα and the Transcriptional Kinases CDK7/9 Control AML in Preclinical Models. Cell. 2018 Sep 20;175(1):171-185.e25.

[6]. Nagashima, Takeyuki, et al. PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING BICYCLIC NITROGEN-CONTAINING AROMATIC HETEROCYCLIC AMIDE COMPOUND AS ACTIVE INGREDIENT. Patent. 20170360780A1
规格 50mg 10mM*1mL in DMSO 100mg 500mg

Lenalidomide是TNF-α 抑制剂。它还具有抗血管生成活性。

Sclareol；香紫苏醇

发表于由

Sclareol；香紫苏醇

货号：
IS0560

品牌：
Jinpan

Sclareol；香紫苏醇

暂无详情
产品简介
MDL MFCD00869558
EC EINECS 208-194-0
别名 硬尾醇;(-)-sclareol
英文名称 Sclareol
CAS 515-03-7
分子式 C20H36O2
分子量 308.5
纯度 HPLC≥98%
单位 瓶
生物活性 Sclareol 从 Salvia sclarea 中分离出来，具有抗癌活性。 Sclareol 对小鼠白血病 (P-388)，人表皮癌 (KB)，以及人白血细胞具有很强的细胞毒活性。Sclareol 诱导细胞凋亡( apoptosis)。[1]
In Vitro Sclareol对14株人白血病细胞系中的13株具有细胞毒性，IC50值在6.0-24.2μg/mL之间，但对相同剂量范围内的外周血单核白细胞无细胞毒性[1]。
SMILES O[C@@]1(C)[C@H](CC[C@@](C)(O)C=C)[C@@]2(C)CCCC(C)(C)C2CC1
靶点 Others
数据来源文献 [1]. Robert Tisserand, et al. Sclareol.Constituent profiles
规格 20mg 100mg

具有labdane skeleton的二萜类化合物，可用于人类白血病的相关研究。

TT实验原理是什么？

发表于由
MTT实验原理是什么？
MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT实验原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
MTT通常用于.细胞增殖及细胞活性测定以及药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
注意事项：
1、在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
2、配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感
3、MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内(个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错)有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.
通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
TT实验原理是什么？

Ciprofloxacin 环丙沙星

发表于由

Ciprofloxacin 环丙沙星

货号：
IC0430

品牌：
Jinpan

Ciprofloxacin 环丙沙星

暂无详情
产品简介
MDL MFCD00185755
EC EINECS 617-751-0
别名 西普乐; CPFX
CAS 85721-33-1
分子式 C17H18FN3O3
分子量 331.34
纯度 HPLC≥98%
单位 瓶
生物活性 Ciprofloxacin 是一种氟喹诺酮类抗生素，具有高效的抗菌 (antibacterial) 活性。[1-3]
In Vitro 环丙沙星是一种氟喹诺酮类抗生素，具有很强的抗菌活性[1]。环丙沙星（CIP）显示出对抗鼠疫菌的强效活性，MIC90为0.03μg/ mL [2]。
In Vivo 与暴露于恩诺沙星的幼虫的抑制GST和过氧化氢酶（CAT）相比，环丙沙星（1mg/L）诱导谷胱甘肽-S-转移酶（GST）活性。环丙沙星（≥10μg/ L）和恩诺沙星对anuran两栖类幼虫的发育，生长，解毒和氧化应激酶具有生态毒性[1]。在肺鼠疫的小鼠模型中，环丙沙星（30mg/kg，ip）导致药物暴露，其类似于在500mg剂量的口服环丙沙星后在人中观察到的药物暴露。与腹膜内PBS治疗对照相比，腹腔内环丙沙星可降低肺部细菌负荷[3]。
SMILES O=C(C1=CN(C2CC2)C3=C(C=C(F)C(N4CCNCC4)=C3)C1=O)O
靶点 Bacterial;Topoisomerase
动物实验 在该测定中使用8至10周龄的雌性BALB/cAnNCr1（BALB/c）小鼠和20g（±4g）。通过腹膜内（ip）途径向小鼠（n = 30）施用单剂量的环丙沙星（30mg/kg）。小鼠（n = 3 /时间点/组）在环丙沙星给药后1小时，10分钟，20分钟或30分钟和1,1.5,2,4,8,12小时和1,15或30分钟和1小时剔除DRCFI或CFI施用后2小时，4小时，6小时，10小时，18小时或24小时。根据环丙沙星的短半衰期和较长的CFI半衰期选择血液采样点。在死后收集血液和肺（整个器官）用于分析。给予CFI或DRCFI后的肺剂量使用给药后1分钟肺样品中环丙沙星的浓度计算[3]。
细胞实验 通过将菌落悬浮于Mueller-Hinton肉汤（CAMHB）（含有环丙沙星）18至24小时（炭疽芽孢杆菌）或42至48小时（鼠疫杆菌）的绵羊血琼脂（SBA）平板上制备细菌接种物。在35°C。用CAMHB将悬浮的培养物稀释至基于600nm处的光密度调节的105CFU/mL的细菌细胞密度。向96孔板的每个孔中加入50μL稀释液，用于~5×10 4 CFU /孔的最终接种物。将板在35℃温育。在18至24小时（炭疽芽孢杆菌）或42至48小时（鼠疫杆菌）以及600纳米的吸光度下目测确定MIC [2]。
数据来源文献 [1]. Peltzer PM, et al. Ecotoxicity of veterinary enrofloxacin and ciprofloxacin antibiotics on anuran amphibian larvae. Environ Toxicol Pharmacol. 2017 Feb 4. pii: S1382-6689(17)30029-7
[2]. Steenbergen J, et al. In Vitro and In Vivo Activity of Omadacycline Against Two Biothreat Pathogens: Bacillus anthracis and Yersinia pestis. Antimicrob Agents Chemother. 2017 Feb 21.
[3]. Hamblin KA, et al. Inhaled Liposomal Ciprofloxacin Protects against a Lethal Infection in a Murine Model of Pneumonic Plague. Front Microbiol. 2017 Feb 6;8:91.
规格 100mg 200mg

是一种氟喹诺酮类抗生素，具有高效的抗菌活性。