细胞周期及其检测

细胞周期及其检测

细胞周期Cell cycle是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程,反映细胞增殖的速度。

一个完整的细胞周期包含间期和分裂期(M期)两个阶段。间期又分为DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)和DNA合成后期(G2期),处于不同时期的细胞的DNA含量存在差异。一般认为,G1期细胞具有增殖活性,参与细胞周期循环,是二倍体细胞;S期细胞,DNA 含量逐渐增加,从二倍体变成四倍体,随后进入G2期,最终进入M期。研究表明,细胞周期检测分析对人肿瘤的诊断预后具有很高的价值。

检测细胞周期常用的方法是检测DNA含量,可以选择能与DNA结合的荧光染料(如PI等),再根据细胞各个时期DNA含量不同从而荧光强度不同的方法,分析各个阶段的细胞比例。

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流式细胞术 / 细胞周期检测

当天检测的活细胞样本

( 1 ) 收集2×105 – 1×106个细胞,离心弃上清。用PBS洗涤一次,离心弃上清。

( 2 ) 加入1mL DNA staining solution和10μL Permeabilization solution,涡旋振荡5 – 10秒混匀。室温避光孵育30分钟。

( 3 ) 选择最低上样速度,在流式细胞仪上进行检测。如需在荧光显微镜下观察,则离心细胞,弃上清,加入新鲜缓冲液重悬。滴加1滴细胞悬液至载玻片,盖上盖玻片后使用合适的滤光片进行观察。

当天无法检测的活细胞样本

( 1 ) 按照下述方法固定,或其他合适的方法固定

(a) 收集2×105 – 1×106个细胞,离心弃上清。轻弹管壁,使沉淀重悬在残余的液体中,加入1 mL 室温下的PBS。

(b) 将细胞缓慢加入3 mL无水乙醇(- 20℃预冷)中,边加边高速搅拌。- 20℃固定过夜,可保存数月。

( 2 ) 检测当天,将固定细胞离心,弃去乙醇,轻弹管壁使沉淀松散,加入2 – 5 mL 室温下的PBS,放置15分钟使细胞再次水化。离心,弃上清。

( 3 ) 加入1 mL DNA staining solution,涡旋振荡5 – 10秒混匀。室温避光孵育30分钟。

( 4 ) 选择最低上样速度,在流式细胞仪上进行检测。如需在荧光显微镜下观察,则离心细胞,弃上清,加入新鲜缓冲液重悬。滴加1滴细胞悬液至载玻片,盖上盖玻片后使用合适的滤光片进行观察。

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CAR T细胞免疫疗法是什么?

CAR T细胞免疫疗法是什么?

很多人可能听说过CAR T细胞,但是你知道CAR T细胞免疫疗法是什么吗?趁着今天空闲的时间,小欣给大家整理了本篇CAR T细胞免疫疗法的内容,供大家参考使用。

CAR-T英文全称是ChimericAntigen Receptor T-Cell ,中文叫嵌合抗原受体T细胞。

CAR-T细胞免疫疗法是医学界新出现的治疗肿瘤和癌症的一种方法。它先从病人身上提取出免疫T细胞,然后利用基因工程技术,在体外写入能让T细胞识别特定肿瘤细胞并杀死肿瘤细胞的基因片段,这种CAR-T细胞在实验室中大量培养,之后再把扩增后的这种’加强型’ 免疫T细胞回输到病人体内进行治疗。

CAR-T治疗简单来说分为下列步骤:

1、采用血浆分离置换法提取收集患者体内白细胞,该步骤提取血液细胞,并分离出一种或多种血液成分。在实验室中,从白细胞中分离出T细胞。

2.、利用基因工程技术给 T 细胞加入一个能识别肿瘤的细胞,并且同时激活 T 细胞杀死肿瘤细胞的嵌合体,普通 T 细胞变身为CAR-T 细胞,它带着 GPS 导航,随时准备找到癌细胞,并且发动自杀性袭击,与之同归于尽。

3、体外培养,大量扩增 CAR-T 细胞,一般一个患者需要几十亿,乃至上百亿个 CAR-T 细胞,往往患者体形越大,需要的细胞越多。

4、把扩增好的 CAR-T 细胞输回患者体内。

5、 严密监护患者,尤其是控制前几天身体的剧烈反应。

CAR-T目前只能治部分的血液性肿瘤。

肿瘤是一种异质性疾病,不同的人患病的原因治疗的方法也都是不一样的,所以个别案例痊愈不等于彻底攻克癌症。

从目前的数据看,CAR-T的短期数据很好,但很快会复发。

Juno的JCAR015一期临床数据显示它在急性淋巴细胞白血病人身上的完全缓解率是87%,也就是说87%的患者治疗后找不到癌细胞了。但是,这87%的患者中有大约60%很快就会复发,活过6个月的人只有59%。所以哪怕是在CAR-T最擅长的白血病领域,它目前也没有能力完全治愈。

目前大多数的CAR-T针对的是CD19这个抗原,CD19只表达在B淋巴细胞上,所以它能够杀B淋巴细胞衍生出的急性淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤,但对于其他肿瘤是完全无能为力的。

由于CAR-T目前只能用病人自身的免疫细胞来改造得到,所以成本高昂。

CAR-T的副作用目前来说还是比较大的。大量的T细胞攻击肿瘤细胞会在短时间内释放出大量的细胞因子,这个过程被称为“细胞因子风暴”,处理不好容易致死。

T细胞,T-Cell

T淋巴细胞(T lymphocyte)简称T细胞,是由来源于骨髓的淋巴干细胞,在胸腺(Thymus)中分化、所以叫T细胞,发育成熟后,通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能。

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F1-ClipTip可调量程手动移液器4641170N-赛默飞官网代理商

产品信息
产品名称:
F1-ClipTip可调量程手动移液器
产品型号:
4641170N
F1-ClipTip可调量程手动移液器4641170N 产品特点
  F1-ClipTip可调量程手动移液器货号 描述 量程 最小步进/包装4641170N F1-ClipTip1-10μL 1-10μL 0.02μL

F1-ClipTip可调量程手动移液器4641170N
产品详细信息:

Thermo Scientific™ F1-ClipTip™ 量程可调移液器现在安静无阻尼,轻松易用,且具有完善的容量可调功能,以及提高的 ClipTip 技术把握性可将吸头牢固锁定到移液器上,以实现完整密封。

描述

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ClipTip 技术可实现安全密封。体验其与众不同之处。

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卡紧 ClipTip 移液器吸头后,即完成密封,吸头将不会松动。即使在最复杂的应用中(包括吸头多次接触和混合反复移液),ClipTip 移液系统将一直保持密封,直到您决定退出吸头。

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F1-ClipTip手动移液器和ClipTip吸头

货号                                       描述                                                价格

4641170N 1-10ul 1538.79 
4641180N 2-20ul  1538.79 
4661110N 1-10ul  5058.15 
4661150N 1-10ul  6041.68 
4641190N 5-50ul 1538.79 
4661120N 5-50ul 5058.15 
4661160N 5-50ul 6041.68 
4641200N  10-100ul 1538.79 
4641210N 20-200ul 1538.79 
4661130N 10-100ul 5058.15 
4661170N 10-100ul 6041.68 
4641220N 30-300ul 1538.79 
4661140N 30-300ul 5058.15 
4661180N 30-300ul 6041.68 
4641230N 100-1000ul  1538.79 

                                     

 

CAY-10603

CAY-10603

货号:
IC3330

品牌:
Jinpan

CAY-10603

暂无详情
产品简介
别名 BML-281
CAS 1045792-66-2
分子式 C22H30N4O6
分子量 446.50
储存条件 -20℃
纯度 ≥98%
单位
生物活性 CAY10603 是一种有效的,选择性的 HDAC6 抑制剂,IC50 值为 2 pM;CAY10603 同时可抑制 HDAC1,HDAC2,HDAC3,HDAC8 和 HDAC10 的活性,IC50 值分别为 271,252,0.42,6851,90.7 nM[1-2]。
IC50 HDAC1:271 nM ; HDAC2:252 nM ; HDAC3:0.42 nM ; HDAC6:0.002 nM ; HDAC10:90.7 nM ; HDAC8:6851 nM [1-2]
In Vitro CAY10603抑制HDAC6脱乙酰酶活性,并抑制肺腺癌细胞的增殖。 CAY10603还诱导肺腺癌细胞的凋亡。此外,CAY10603与吉非替尼协同诱导肺腺癌细胞系凋亡,部分原因是EGFR的去稳定化和EGFR通路的失活[2]。CAY10603显示出对胰腺癌细胞系的有效抑制活性,对于BxPC-3,HupT3,Mia Paca-2,Panc 04.03,SU,IC 50为1,3.5,0.1,0.1,0.6,<0.5μM。 86.86,HMEC,HPDE6c7。 CAY10603(100 nM,200-300 nM)对Mia Paca-2和Panc04.03细胞系均有活性[1]。
激酶实验 将纯化的HDAC与1mm羧基荧光素(FAM)标记的乙酰化肽底物和测试化合物在25℃下在含有100mm HEPES(pH 7.5),25mm KCl,0.1%BSA和0.01%的HDAC测定缓冲液中孵育17小时。 Triton X-100。通过加入含有0.078%SDS的缓冲液终止反应,最终SDS浓度为0.05%。使用具有蓝色激光激发和绿色荧光检测(CCD2)的Caliper LabChip 3000系统电泳分离底物和产物。使用Caliper系统上的Well Analyzer软件确定底物中的荧光强度和产物峰。对于每个样品,反应一式两份进行。使用适用于Microsoft Excel的IDBS XLFit版本4.2.1插件和XLFit 4参数逻辑模型(S形剂量反应模型)自动计算IC50值:((A +((B_A)/ 1 +((C/x) )D)))),其中x是化合物浓度,A和B分别是估计的抑制百分比的最小值和最大值,C是拐点,D是S形曲线的Hill斜率。
SMILES O=C(OC(C)(C)C)NC1=CC=C(C2=CC(C(NCCCCCCC(NO)=O)=O)=NO2)C=C1
靶点 HDAC
细胞实验 从ATCC获得胰腺癌细胞系BxPc-3,HupT3,Mia Paca-2,Panc 04.03和SU 86.86,并在含有10%胎牛血清和1-谷氨酰胺的培养基(DMEM或RPMI)中生长。将胰腺癌细胞一式两份铺板到96孔微量滴定板的6个孔中,每孔2.5-4P103个细胞。接种后4小时,用稀释剂(DMSO)或不同浓度的SAHA或指定的HDACI处理各孔,浓度为1nm至50mm。在时间“0”和使用比色MTT测定的处理后72小时测量细胞毒性。使用XLfit计算IC 50值。
数据来源文献 [1]. Kozikowski AP, et al. Use of the nitrile oxide cycloaddition (NOC) reaction for molecular probe generation: a new class of enzyme selective histone deacetylase inhibitors (HDACIs) showing picomolar activity at HDAC6. J Med Chem. 2008 Aug 14;51(15):4370-3.
[2]. Wang Z, et al. HDAC6 promotes cell proliferation and confers resistance to gefitinib in lung adenocarcinoma. Oncol Rep. 2016 Jul;36(1):589-97.
规格 5mg 10mg

CAY10603是一种强效的选择性HDAC6抑制剂。

Media美的医用低温冰箱MD-25L96

Media美的医用低温冰箱MD-25L96

Media美的医用低温箱-25℃ MD-25L96

产品编号:
市场价:¥0.00
会员价:¥0.00
品牌:Media美的
生产厂家:Media美的

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Media美的医用低温箱-25℃ MD-25L96

可用作金枪鱼专用储存箱,用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品、远洋制品、电子器件及应用于特殊材料的低温试验等。

适用于医院、血站、疾病预防控制中心、科研院所、各类医学、

生物科学实验室、军工企业、远洋渔业(餐饮业)等。

特点:

1.      精准控温 安全可靠

微电脑温度控制,箱内温度-10℃~-25℃可调,可设定开停机温差;

具备完善的报警系统,有蜂鸣器声音及灯光闪烁报警功能;

可实现高低温报警、传感器故障报警等功能,报警温度值可按需设定;

多重保护功能,确保传感器故障时制冷系统稳定运行。

2.       高效制冷 全效保温

LBA发泡保温技术,门体双重密封设计,有效保持箱内温度;

高效制冷系统,国际名牌压缩机,制冷强劲高效;

优化蒸发器管路设计,保证制冷剂量有效流动,箱内温度均匀性佳;

碳氢制冷剂,绿色环保。

3.       人性化设计

食品级不锈钢内胆、多层ABS抽屉(仅立式),易清理耐腐蚀,使用灵活方便;

固定脚轮+万向轮设计,移动、固定更方便;

安全门锁设计,防止随意开启;

LED温度显示,观察方便,清晰直观;

宽电压、宽温区设计,适用于187V~253V宽电压和10℃~32℃温度环境使用,确保设备稳定运行;

可选安装数字温度记录仪,并设有USB接口,便于记录和保存运行数据。

技术参数:

产品型号

箱内温度(

有效容积(L

外部尺寸

(宽** mm

内部尺寸

(宽**mm

功率(W

搁架/内门/抽屉

(选配)

MD-25L96

-10~-25

96

595*600*850

407*426*637

70

3

MD-25L295

-10~-25

295

595*600*1935

416*438*1716

120

8

MD-25W198

-10~-25

198

945*523*850

820*375*700

180

/

MD-25W288

-10~-25

288

1115*670*850

960*490*650

200

/

MD-25W368

-10~-25

368

1256*750*825

1100*550*647

250

/

MD-25W568

-10~-25

568

1870*750*825

1715*550*647

300

/

Coptisine 黄连碱

Coptisine 黄连碱

货号:
IC0530

品牌:
Jinpan

Coptisine  黄连碱

暂无详情
产品简介
MDL MFCD00867219
别名 小檗碱
CAS 3486-66-6
分子式 C19H14NO4
分子量 320.32
纯度 HPLC≥98%
单位
生物活性 Coptisine 是从黄连中分离到的生物碱,是一种有效的非竞争性的 IDO 抑制剂,Ki 值为 5.8 μM,IC50 值为 6.3 μM[1-2]。
In Vitro Coptisine(0.1-100μM)抑制A549,H460,H2170,MDA-MB-231和HT-29细胞的增殖,IC50分别为18.09,29.50,21.60,20.15和26.60μM。 Coptisine(12.5,25,50μM)上调pH2AX和p21的表达,降低细胞周期蛋白B1,cdc2和cdc25C的表达,并以浓度依赖性方式诱导A549细胞的G2/M阻滞和凋亡。 Coptisine(12.5,25,50μM)也诱导线粒体功能障碍并激活A549细胞中的半胱天冬酶活性。此外,Coptisine(50μM)以时间依赖性方式(0.5,1,2,4,12和24小时)增加ROS水平[2]。
In Vivo Coptisine以浓度依赖性方式显示小鼠毒性增加,LD50值为880.18mg/kg。连环蛋白(154mg/kg /天,90天)对SD大鼠没有毒性。 Coptisine(23.35,46.7,70.05 mg/kg,po)剂量依赖性地降低TC,TG和LDL-c水平,并增加仓鼠血清中HDL-c含量至不同程度,减缓HFHC诱导的体重增加饮食,并在仓鼠中剂量依赖性地提高粪便中胆固醇和TBA的水平。 Coptisine(70.05 mg/kg,po)抑制HMGCR蛋白表达水平并诱导参与胆固醇代谢的SREBP-2,LDLR和CYP7A1的蛋白表达[1]。
SMILES C1(C(CC[N+]2=C1C=C(C=C3)C(C4=C3OCO4)=C2)=C5)=CC6=C5OCO6
靶点 Indoleamine 2,3-Dioxygenase (IDO)
动物实验 小鼠[1]在昆明小鼠上测试黄连碱的急性毒性,每组10只小鼠(每只雄性和雌性一半)。将Coptisine溶解于蒸馏水中,制备8个剂量(482.5,579,694,833,1,000,1,200,1,440和1,728mg/kg)给药。口服给药后,观察每只小鼠的反应,包括死亡率,并记录1周,以获得Coptisine的LD50值。大鼠[2]将40只SD大鼠分成对照组和Coptisine组(每只雄性和雌性的一半),处理90天。通过人体等效剂量(HED)和体表面积(BSA)归一化方法计算动物剂量。为了确定亚慢性毒性,使用对于成人(60kg)的最大HED of Coptisine(25mg/kg)作为参考,获得了Coptisine对SD大鼠(154mg/kg /天)的实际剂量。对照组大鼠给予相同体积的0.9%盐水。在整个实验中,给所有动物喂食正常饮食和随意饮水。每天记录大鼠的一般外观和行为,每10天测量一次体重,每天观察两次临床症状和死亡率。
细胞实验 将100mM浓度的Coptisine溶解在DMSO中,随后通过用细胞培养基稀释来制备浓度在100和0.1μM之间的浓度。在每次处理中使用的最终DMSO浓度小于0.1%。进行MTT测定以评估Coptisine的细胞增殖效应。简而言之,将2500个细胞/孔接种在含有补充有10%FBS和1%青霉素 – 链霉素的DMEM培养基的96孔板中。加入一系列Coptisine浓度并在5mM NAC存在或不存在下孵育48小时。温育48小时后,向每个孔中加入15μLMTT(5mg/mL)并在37℃下孵育4小时。然后,除去上清液并向每个孔中加入150μLDMSO以溶解晶体。通过Spectramax M4读板仪在595nm处测量吸光度[2]。
数据来源文献 [1]. He K, et al. The safety and anti-hypercholesterolemic effect of coptisine in Syrian golden hamsters. Lipids. 2015 Feb;50(2):185-94.
[2]. Rao PC, et al. Coptisine-induced cell cycle arrest at G2/M phase and reactive oxygen species-dependent mitochondria-mediated apoptosis in non-small-cell lung cancer A549 cells. Tumour Biol. 2017 Mar;39(3):1010428317694565
规格 5mg 10mg

是一种有效的非竞争性的 IDO 抑制剂。

Amersco-0573-1G-5-磷酸吡哆醛,一水-

【简单介绍】

5-磷酸吡哆醛,一水,英文名称:PYRIDOXAL-5-PHOSPHATE,MONOHYDRATE,等级:高纯级,包装规格:1G分装,CAS:41468-25-1

【详细说明】

5-磷酸吡哆醛,一水,英文名称:PYRIDOXAL-5-PHOSPHATE,MONOHYDRATE,等级:高纯级,包装规格:1G分装,CAS:41468-25-1

PYRIDOXAL-5-PHOSPHATE MONOHYDRATE
Grade:HIGH PURITY GRADE
CAS Number: 41468-25-1Synonym(s): None
Molecular Weight: 265.1Molecular Formula: C8H10NO6P.H2O
CodeSizePriceQuantity
0573-5G