Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

术语dPEG®代表离散PEGdiscrete PEG,这是一种均一的、单分子量(MW)、高纯度的新一代聚乙二醇聚合物。Vector Laboratorie采用其受专利保护的专有生产工艺,可生产提供适合于各种应用场景,具有特定分子量、活性基团、功能分子和架构(如图1和图2所示)dPEGPEG分子本身具有惰性、无毒性、水溶性和生物相容性,这些特性与dPEG的上述所提及的特征相结合时,它将成为设计、优化与开发生物偶联疗法的强有力工具[1][2]


Vector Labs可提供的dPEG产品种类

基于dPEG的系列产品

◆ 用于偶联生物制品、有效载荷、载体和表面的Homo-hetero-和多功能交联剂。

◆ 各类反应基团种类繁多,可用于偶联反应的基团,包括点击化学(click chemistry),生物正交(biorthogonal),位点特异性(site-specific),酶催化(enzymatic)和随机方法(stochastic approaches)。

◆ 柔性Linker架构设计的构建模块和中间体。

◆ 具有各种规格、结构和加帽的化学修饰试剂。

◆ 用于聚合物和脂质纳米颗粒的嵌段共聚物。

◆ 亲和标签,如生物素、脂质和半抗原等

◆ 高亲水性的荧光基团

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

1dPEG® 产品的功能基团、反应基团、标记基团和保护基团示例。

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

2dPEG®产品的可用架构。支链dPEG®产品可以有3个或9个分支。Sidewinder™产品是一类新的dPEG®结构,可通过多种新方式将dPEG®应用于诊断和治疗行业。BodyArmor®产品结构类似于Sidewinder,但其包括额外的正交dPEG®链。

 

dPEG与传统PEG的比较

传统的PEG(聚乙二醇)具有较大的分子量,并具有分散性。其在药物开发中的首次临床应用是对蛋白质、肽和酶(OncasparAdagenPeg-Intron等)进行PEG化,以改善其药物代谢和药代动力学 (DMPK) 特性。 这种通过共价连接PEG来改变药物理化(PC)或 DMPK特性的方法目前已用于多种治疗方式,包括抗体片段、肽、小分子、寡核苷酸和纳米颗粒等。


Vector LaboratoriesdPEG或均一PEG(均质PEG)可用于进一步优化药物理化和治疗药物的吸附、分布、代谢、消除和毒性(ADMET)特性,以达到靶向性、溶解性和稳定性的要求。表 1  列举了dPEG与传统PEG 相比的一些优势。

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

1:传统PEGdPEG的区别。

 

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

Fig1  传统PEG dPEG®(Vectorlabs)质谱图比较

 

dPEG的广泛应用

由于其独特的生物相容性、一致性和可设计性,dPEG可在各种应用中提供良好的性能,主要包括以下方面:

◆ 作为偶联物的Linker,如抗体药物偶联物(ADCs)、片段药物偶联物(FDCs)、蛋白质药物偶联物(PDCs)、小分子药物偶联物(SMDCs)、寡核苷酸偶联物(OCs)和药物传递系统(DDS),没有烷基linker的疏水性和多分散linker的不确定性(见表2)。

◆ 间隔剂和空间修饰试剂(Spacers and spatial modifiers),以高度的灵活性探索和优化临近效应(proximity effects)。

◆ 表面调节剂用于改变小分子、寡核苷酸、多肽、蛋白质、抗体、聚合物、树状大分子、脂质纳米颗粒和无机表面/纳米颗粒的大小、形状、电荷、疏水性、渗透性等

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

2:不同交联剂类型的比较 

 

文献引用

Jinming Hu., Shiyong Liu., et al. (2022). Emerging trends of discrete Poly(ethylene glycol) in biomedical applications. Curr Opin Biomed Eng, V. 24(100419), 2468-4511.

Quiles S., Raisch K.P., Sanford L.L., Bonner J.A., Safavy A., et al. (2010). Synthesis and preliminary biological evaluation of high-drug-load paclitaxel-antibody conjugates for tumor-targeted chemotherapy. J. Med. Chem., 53(2), 586-94.

 

 

品牌简介

Vector Laboratories|用于生物偶联疗法BioDesign™ dPEG® Linker连接平台

Vector Laboratories位于旧金山湾区,由Jim Whitehead博士于1976年创建该品牌,Vector致力于为世界各地的研究人员创造性能最佳的产品。2016年被Maravai LifeSciences品牌收购,成为其品牌一部分。Vector Laboratories是研发免疫组织化学、免疫荧光、糖生物学和生物结合的标记和检测试剂的先驱,并已成为该领域市场的领导者。作为第一家开发出avidin-biotin酶复合物试剂盒(VECTASTAIN ABC试剂盒)用于免疫组织化学染色和抗荧光淬灭封片剂(VECTASHIELD® Mounting Media)用于免疫荧光染色的商业化公司,Vector已经从世界各地引进了600多种用于疾病和治疗研究的试剂和试剂盒。Vector的设施通过了ISO 9001:2015认证,其研究成果已被350,000多种科学出版物引用。

 

请联系Vector Laboratories中国代理商——上海金畔生物

Vector产品经理:15221999938 微信同号


CleanAmp™ dNTP应用:24min完成三重qPCR

CleanAmp™ dNTP应用:24min完成三重qPCR

试剂:CleanAmp™ PCR Kit

仪器:Mastercycler® ep realplex4 S qPCR instrument

分子诊断需求的不断增长(如新冠核酸检测),要求所用检测试剂、设备能在更短的时间内提供准确的、可重复的检测结果。这种需求下,多重实时PCRMultiplex qPCR)是一项很有用的技术,可省时、省力、省样本,还能降低成本。然而尽管多重qPCR检测技术有着诸多优点,但实际应用时却需要进行很多的优化来避免由于引物组增加而造成的扩增效率下降的问题。TrilinkCleanAmp™ dNTP试剂完美的解决了这一问题,本文展示了使用TrilinkCleanAmp™ dNTP试剂和灵敏的qPCR仪器实现快速三重qPCR的案例


CleanAmp™ dNTPTrilink运用自己专业的核酸修饰技术开发的专利产品


PCR的热启动,通常要通过使用热启动酶来实现。而PCR实验中,简单的将标准dNTP替换为CleanAmp™ dNTP即可获得与使用昂贵的热启动酶相同的优势。CleanAmp™ dNTP是经过修饰的核苷三磷酸,该修饰可以在反应初期阻止核苷酸掺入直至dNTP被热激活,如此可极大地减少错误引发,避免引物二聚体形成以及其他可能的不良影响,从而在多重和快速PCR实验中具有非常好的性能。CleanAmp™ PCR Kit试剂盒中提供CleanAmp™ dNTP包括已成功验证过的DNA聚合酶。该试剂盒可以灵活地用于多种PCR检测,包括快速和多重PCR


Eppendorf realplex4 S real-time PCR系统使用超快的珀尔帖(Peltier热循环模块以6°C /秒的速度加热并以4°C /秒的速度冷却,在一小时内即可完成标准的40循环qPCR反应珀尔帖模块还可以确保温度控制的精确性以及较高的模块均质性,这对于高质量PCR反应至关重要。该系统的光学模块是一个由96LED 组成的阵列,这些LED可以预先选择均衡,以使它们可以均匀激发所有样本孔。这种设置消除使用其他常规qPCR仪器时,需要用ROX作为校正染料的必要性Realplex4 S使用了光电倍增管(PMT)进行信号检测,这是目前可用的最灵敏,最经济的检测技术。


为了进一步探索CleanAmp™ PCR试剂盒和Eppendorf realplex4 S real-time PCR系统的优势,本文的研究以这两种技术的结合为特色,在30分钟内完成可重复性的实时三重PCR的检测。

方法


使用CleanAmp™dNTP试剂盒与水解探针在realplex4 S real-time PCR系统进行实时三重PCR检测使用CleanAmp™ PCR试剂盒扩增了三个小鼠基因组DNA靶标,分别为125185214个碱基对。实验分两组进行:首先,分别使用标准和快速PCR对三个靶标同时进行三重扩增(图1)。其次,使用快速PCR对三个靶标进行同时扩增和单个扩增(图2)。所有反应均带有Master clear™盖条的Eppendorf实时PCR管条通过使用水解探针进行检测:125 bp6-JOE; 0.2 µM),185 bpFAM; 0.05 µM)和214 bpROX; 0.2 µM)。


   CleanAmp™ dNTP应用:24min完成三重qPCR

首先,对标准和快速循环流程下的三重qPCR实验进行了评估。所有反应均设置一式四份,并使用小鼠基因组DNA5倍系列稀释液为样本,范围从320 pg1.0 µg。标准热循环qPCR实验的方案按照CleanAmp™ PCR试剂盒产品说明书中的多重PCR方案1X PCR缓冲液(10 mM Tris-HClpH 8.3),50 mM KCl2.5 mM MgCl2),0.4 mM CleanAmp™ dNTP0.01 U / µL Taq DNA聚合酶和0.2 µM引物,25 µL)。在快速多重PCR实验方案在上述方案的基础上进行了以下改变:70 mM KCl4.0 mM MgCl20.6 mM CleanAmp™ dNTP0.33 U /μL U Taq DNA聚合酶,引物(125 bp185 bp组为0.5 µM214 bp引物组为0.7 µM,15 µL)


其次,在快速循环条件下进一步评估CleanAmp™ dNTP试剂盒,分别以单重和多重反应扩增三个相同的靶标。依然使用小鼠基因组DNA5倍系列稀释液为样本,范围从320 pg200 ng,并设置三重复。快速循环条件和热循环条件按照如上所述方案进行。对于单重反应,遵循CleanAmp™ PCR Kit产品说明书中的快速热循环方案1x PCR缓冲液(10 mM Tris-HClpH 8.3),50 mM KCl4.0 mM MgCl2),0.4 mM CleanAmp ™ dNTPs0.33 U / µL Taq DNA聚合酶和0.5 µM引物,15 µL体系)。

结果与结论


对比标准和快速两个条件下的三重 qPCR的结果显示:两者分别1 h 26 min24 min的热循环时间内得到稳定的数据。在两种反应条件下,扩增曲线间隔良好,重复紧密。R2显示标准曲线符合良好的线性,且不同靶标、不同检测的扩增效率相当(Figure.1)同样在快速循环条件下分别进行的单指标和三重指标的扩增结果也类似:对于每个靶浓度,单指标和三重指标的扩增曲线重合如图2所示。因此,每个反应相似的Cq反应了不同反应的扩增效率的一致性,如表(2B)所示。这些发现展示CleanAmp™ PCR试剂盒的多功能性和Mastercycler® ep realplex4 qPCR仪的速度,两者相互补充,仅在24分钟内就能获得高效、可重复的三重qPCR数据。


CleanAmp™ PCR试剂盒和Mastercycler® ep realplex4 S qPCR仪的组合使我们能够在保持标准PCR单指标PCR可得到的高扩增效率的同时,实现快速三重qPCR.

更多详情请联系TriLink中国代理商——上海金畔生物

全国服务热线: 15221999938       邮箱: sales@jinpanbio.com   

深圳: 021-50837765       北京: 021-50837765         

上海: 021-50837765         广州021-50837765          

代理品牌网站: www.jinpanbio.com   

自主品牌网站: www.jinpanbio.cnet 

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

核酸酶靶向切割和释放 (CUT&RUN)技术是由Steven henikoff博士团队开发的一种染色质图谱分析方法,基于Ulrich Laemmli博士的染色质免疫切割技术 (ChIC),融合蛋白A与微球菌核酸酶 (pA-MNase),选择性原位切割与抗体结合的染色质。在CUT&RUN中,细胞或细胞核固定化在固相载体上,从溶液中分离出pAG-MNase裂解的DNA片段。该方法与二代测序(NGS)兼容,可提供高质量的组蛋白翻译后修饰(PTMs)和染色质相关蛋白(如转录因子;Figure 1)。

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

ChIP-seq是组蛋白PTMs和染色质相关蛋白全基因组定位的主要方法。在这种方法中,染色质通过超声或酶消化破碎,然后免疫沉淀目标特异性片段。尽管进行优化,但ChIP-seq需要大量细胞(通常为105 – 106个细胞)而且需要深度测序input 染色质与免疫沉淀物质(通常为 >3000万 reads/次)来从背景中解析信号。

ChIC和CUT&RUN通过将基因组片段靶向释放到溶液中,彻底改变了染色质调控。通过这一创新,背景显著减少,允许使用少量细胞且每个反应仅需300 – 800万reads/次对组蛋白PTMs和染色质相关蛋白进行高分辨率基因组图谱的绘制(Figure 2)。简化的工作流程和节省的成本使ChIC/CUT&RUN适用于高通量研究表观遗传生物学。


Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

FIGURE 2 Representative genome browser tracks show CUTANA™ CUT&RUN results using 500,000 K562   cells.  Clear peaks with the expected distribution profile are observed using 3-8 million sequencing  reads per reaction for a variety of epigenetic targets, including histone PTMs (H3K4me3, H3K27me3,  H3K27ac), transcription factors (CTCF), epigenetic reader proteins (BRD4), writer enzymes (MLL1),   and chromatin remodelers (SMARCA4).  Rabbit IgG antibody shown as a negative control (top track).

CUTANA™ChIC/CUT&RUN试剂盒包含48个反应的材料,专为多通道移液而设计,以实现CUT&RUN的高通量优势。该试剂盒包括阳性(H3K4me3)和阴性(Rabbit IgG)对照抗体,以及SNAP-CUTANA™ K-MetStat Panel (16个DNA条形码设计核小体携带广泛研究的赖氨酸甲基化PTMs)的分装分量。K-MetStat Panel加入到对照反应中,直接监测实验成功与否并帮助排除故障。此外,在pAG-MNase切割后,将剪切的E. coli DNA添加到所有反应中,以控制文库构建并使NGS标准化。该试剂盒与细胞和细胞核兼容,包括冻存和交联样品(Figure 3)。

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

FIGURE 3 Heatmaps show CUT&RUN signal (red) and background (blue) of H3K4me3-enriched regions flanking annotated transcription start sites (TSS, +/- 2 kb). Gene rows are aligned across conditions, showing that genome-wide enrichment is preserved across sample types.


尽管建议从500,000个细胞开始,但只需使用5,000个细胞即可生成可比较的数据(Figure 4)。对照组的加入以及与不同靶类型、样本和低细胞数的兼容性,使该试剂盒成为染色质图谱实验的首选解决方案。

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

FIGURE 4 Representative genome browser tracks for H3K4me3 (low abundance target) and H3K27me3  (high abundance target) CUT&RUN experiments using decreasing amounts of K562 cells. At 5,000   cells, data quality is largely indistinguishable from standard conditions (500,000 cells).

 保存条件 

OPEN KIT IMMEDIATELY and store components at room temperature, 4℃, and -20℃ as indicated (see User Manual corresponding to Kit Version 3). Stable for 6 months upon date of receipt.

Room Temperature (RT)

4℃

-20℃

8-strip Tubes

ConA Beads

5% Digitonin

0.5 M EDTA

E. coli Spike-in DNA

1 M Spermidine

100 mM Calcium Chloride

Bead Activation Buffer

SNAP-CUTANA™ K-MetStat Panel

SPRIselect Reagent

Manufactured by

Beckman Coulter Inc.

Pre-Wash Buffer

H3K4me3 Positive Control Antibody

0.1×TE Buffer

Stop Buffer

Rabbit IgG Negative Control Antibody

pAG-MNase

 数据示例 

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

Figure 1: CUT&RUN DNA fragment size distribution analysis

CUT&RUN was performed as described in Figure 5. Library DNA was analyzed by Agilent Tapestation®. This analysis confirmed that mononucleosomes were predominantly enriched in CUT&RUN (~300 bp peaks represent 150 bp nucleosomes + sequencing adapters).

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

FIGURE 2 SNAP-CUTANA™ K-MetStat Spikein Controls

DNA-barcoded designer  nucleosomes (dNucs) representing 16 K-methyl PTMs: mono-, di-, and tri-methylation at H3K4, H3K9, H3K27, H3K36, and H4K20, as well as  unmodified control, were spiked into CUT&RUN  reactions prior to the addition of antibodies (IgG, H3K4me3). Spike-in barcodes were counted and  normalized from raw fastq files using the shell  script and analysis sheet available at  epicypher.com/19-1002. Barcodes for IgG (top;  normalized to total reads) and H3K4me3 (bottom; normalized to on-target) antibodies are  shown. The spike-ins confirmed optimal  experimental conditions (H3K4me3 antibody  specifically recovered the target dNuc, while IgG  showed no preferential enrichment).

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

Figure 3: CUT&RUN genome-wide heatmaps

CUT&RUN was performed as described in Figure 5. Heatmaps show two replicates (“Rep”) of IgG (left) and H3K4me3 (right) kit control antibodies in aligned rows ranked by intensity (top to bottom) and colored such that red indicates high localized enrichment and blue denotes background signal.

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

Figure 4: Representative gene browser tracks

CUT&RUN was performed as described in Figure 5. A representative 174 kb window at the TRMT2A gene is shown for two replicates (“Rep”) of IgG and H3K4me3 kit control antibodies. Representative tracks are also shown for antibodies to H3K27me3 and the transcription factor CTCF. The CUT&RUN kit produced the expected genomic distribution for each target. Images were generated using the Integrative Genomics Viewer (IGV, Broad Institute).

Epicypher热销产品——CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

Figure 5: CUT&RUN methods

CUT&RUN was performed using the CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit starting with 500k K562 cells with 0.5 µg of either IgG (EpiCypher 13-0042), H3K4me3 (EpiCypher 13-0041), H3K27me3 (EpiCypher 13-0055), or 0.125 µg of CTCF (EpiCypher 13-2014) antibodies in duplicate. Library preparation was performed with 5 ng of DNA (or the total amount recovered if less than 5 ng) using the CUTANA™ Library Prep Kit (EpiCypher 14-1001/14-1002). Libraries were run on an Illumina NextSeq2000 with paired-end sequencing (2×50 bp). Sample sequencing depth was 3.5 million reads (IgG Rep 1), 3.8 million reads (IgG Rep 2), 4.7 million reads (H3K4me3 Rep 1), 6.9 million reads (H3K4me3 Rep 2), 6.6 million reads (H3K27me3 Rep 1), 4.7 million reads (H3K27me3 Rep 2), 3.9 million reads (CTCF Rep 1) and 4.6 million reads (CTCF Rep 2). Data were aligned to the hg19 genome using Bowtie2. Data were filtered to remove duplicates, multi-aligned reads, and blacklist regions. 

 订购详情 

货号

产品名称

规格

14-1048

CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit

48 Reactions

 

如需了解更多详细信息或相关产品,请联系EpiCypher中国代理商-上海金畔生物 

PFA软管3φ×2φ(1m)耗材-Wako富士胶片和光

PFA软管3φ×2φ(1m)耗材-Wako富士胶片和光

应用领域 综合    

PFA软管3φ×2φ(1m)
本品为PF软管,具有良好的耐热性、低摩擦性、绝缘性、耐化学性、非粘性及耐候性等多种优点。
◆特点
● 本品无粘性,不易附着污垢和水垢。
● 在高温、高湿和高频环境下的电气性能不易降低,适合用于电气绝缘。
● 耐候性良好。
● 高使用温度为260℃,但需连续使用时,温度好控制在200℃以下。
● 与PTFE软管相比,PF软管更加透明。

PFA软管3φ×2φ(1PFA软管3φ×2φ(1m)耗材-Wako富士胶片和光

PFA软管3φ×2φ(1m)耗材-Wako富士胶片和光

  本品为PFA软管,具有良好的耐热性、低摩擦性、绝缘性、耐化学性、非粘性及耐候性等多种优点。

◆特点

● 本品无粘性,不易附着污垢和水垢。

● 在高温、高湿和高频环境下的电气性能不易降低,适合用于电气绝缘。

● 耐候性良好。

● .高使用温度为260度,但需连续使用时,温度.好控制在200度以下。

● 与PTFE软管相比,PFA软管更加透明。

◆材料

PFA

◆产品列表

产品编号

产品名称

外径×内径×管壁厚度(mm)

规格

长度

WEB5657

PFA软管

3 φ×2 φ×0.5

3 φ×2 φ(1 m)

1 米

◆相关产品

产品编号

产品名称

外径×内径×管壁厚度(mm)

规格

长度

WEB18470

PFA软管

15 φ×13 φ×1.0

15 φ×13 φ(10 m/卷)

10 米

WEB18471

PFA软管

16 φ×13 φ×1.5

16 φ×13 φ(10 m/卷)

10 米

WEB18472

PFA软管

16 φ×14 φ×1.0

16 φ×14 φ(10 m/卷)

10 米

WEB18473

PFA软管

18 φ×15 φ×1.5

18 φ×15 φ(10 m/卷)

10 米

WEB18474

PFA软管

18 φ×16 φ×1.0

18 φ×16 φ(10 m/卷)

10 m

WEB18475

PFA软管

19 φ×16 φ×1.5

19 φ×16 φ(10 m/卷)

10 米

WEB18476

PFA软管

22 φ×19 φ×1.5

22 φ×19 φ(10 m/卷)

10 米

WEB18477

PFA软管

25 φ×22 φ×1.5

25 φ×22 φ(10 m/卷)

10 米

WEB5658

PFA软管

4 φ×2 φ×1.0

4 φ×2 φ(1 m)

1 米

WEB5659

PFA软管

4 φ×3 φ×0.5

4 φ×3 φ(1 m)

1 米

WEB5660

PFA软管

6 φ×4 φ×1.0

6 φ×4 φ(1 m)

1 米

WEB5661

PFA软管

6 φ×5 φ×0.5

6 φ×5 φ(1 m)

1 米

WEB5662

PFA软管

8 φ×6 φ×1.0

8 φ×6 φ(1 m)

1 米

WEB5663

PFA软管

8 φ×7 φ×0.5

8 φ×7 φ(1 m)

1 米

WEB5664

PFA软管

10 φ×8 φ×1.0

10 φ×8 φ(1 m)

1 米

WEB5666

PFA软管

12 φ×10 φ×1.0

12 φ×10 φ(1 m)

1 米

WEB5669

PFA软管

15 φ×13 φ×1.0

15 φ×13 φ(1 m)

1 米

WEB5670

PFA软管

16 φ×13 φ×1.5

16 φ×13 φ(1 m)

1 米

WEB5671

PFA软管

16 φ×14 φ×1.0

16 φ×14 φ(1 m)

1 米

WEB5672

PFA软管

18 φ×15 φ×1.5

18 φ×15 φ(1 m)

1 米

WEB5673

PFA软管

18 φ×16 φ×1.0

18 φ×16 φ(1 m)

1 米

WEB5674

PFA软管

19 φ×16 φ×1.5

19 φ×16 φ(1 m)

1 米

WEB5675

PFA软管

22 φ×19 φ×1.5

22 φ×19 φ(1 m)

1 米

WEB5677

PFA软管

25 φ×22 φ×1.5

25 φ×22 φ(1 m)

1 米

WEB5679

PFA软管

3 φ×2 φ×0.5

3 φ×2 φ(10 m)

10 米

WEB5680

PFA软管

4 φ×2 φ×1.0

4 φ×2 φ(10 m)

10 米

WEB5681

PFA软管

4 φ×3 φ×0.5

4 φ×3 φ(10 m)

10 米

WEB5682

PFA软管

6 φ×4 φ×1.0

6 φ×4 φ(10 m)

10 米

WEB5683

PFA软管

6 φ×5 φ×0.5

6 φ×5 φ(10 m)

10 米

WEB5684

PFA软管

8 φ×6 φ×1.0

8 φ×6 φ(10 m)

10 米

WEB5685

PFA软管

8 φ×7 φ×0.5

8 φ×7 φ(10 m)

10 米

WEB5686

PFA软管

10 φ×8 φ×1.0

10 φ×8 φ(10 m)

10 米

WEB5688

PFA软管

12 φ×10 φ×1.0

12 φ×10 φ(10 m)

10 米

WEB5690

PFA软管

14 φ×12 φ×1.0

14 φ×12 φ(10 m)

10 米

  富士胶片和光(广州)贸易有限公司是日本富士胶片和光纯药株式会社(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation,以下称”富士胶片和光”)在中国的子公司,主营富士胶片和光品牌试剂产品,囊括合成与材料、分析、培养、生命科学、药品生产与品质管理领域。和光纯药工业株式会社(前武田药品工业株式会社)成立于1922年,2017年被富士胶片集团全面收购而成为集团成员之一。富士胶片和光是日本的试剂企业,也是优质的试剂供应商,在美国、欧洲和中国都设有分公司。自成立以来,一直致力于高品质的试剂生产与开发,并获得ISO9001,ISO/IEC17025,ISO14000等(部分)多项认证。

  通过对本次收购,富士胶片集团将充分发挥其在胶片领域积累的化学合成、纳米、生产等技术,在医疗健康事业、高性能材料事业两个核心业务中实现协同增效作用。尤其是医疗健康事业,在颇具市场潜力的再生医学、生物制药等领域都将产生巨大的协同增效作用。

  富士胶片和光所供应的FUJIFILM Wako品牌试剂产品超过50,000多种,涉及生命科学、分析化学、有机、无机化学、生物工程、高纯度及认证标准品、食品、医药、环境分析、疾病和有效治疗研究、再生医疗研究、天然提取物、中药研究等,从基础研究至关乎人类健康的前沿的生命科学研究都有相关产品。

  随着富士胶片集团对生命科学领域的更大重视和投入,今后富士胶片和光将继续为中国客户提供更多前沿、品质可靠的产品。

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel是 CUT&RUN 的加标对照,提供了一种用于验证抗 FLAG®* 抗体的分析内对照,并证实了涉及FLAG表位标记的染色质蛋白的CUT&RUN反应的成功。这种重要的阳性对照可指导故障排除,以区分 FLAG 表位标记问题(包括转基因表达、标记蛋白的染色质结合、标签的溶剂可及性等)与 CUT&RUN 工作流程中的技术故障。该panel由两个包含未修饰组蛋白H3或3xDYKDDDDK-H3融合的核小体组成,每个核小体都包裹有两个独特的条形码DNA模板(A和B,用于内部技术复制)。核小体单独与顺磁珠偶联并汇集到单个panel中,方便一步加标到CUT&RUN反应。在添加抗 DYKDDDDK 或 IgG 阴性对照抗体之前,将 panel 与 ConA 固定的细胞一起添加(参见应用说明和表 1)。pAG-MNase释放基因组染色质和条形码核小体取决于所使用抗体的特异性。测序后,回收的 DYKDDDDK 与未修饰核小体的相对读取计数提供了靶向与脱靶回收率的定量指标(图 2),从而衡量实验成功率并指导故障排除工作。有关工作流集成、预期结果、数据分析和故障排除的详细信息,请参阅最新的CUTANA™ CUT&RUN方法(https://www.epicypher.com/resources/protocols/cutana-cut-and-run-kit-manual)和SNAP-CUTANA™ Spike-in(https://www.epicypher.com/resources/protocols/)用户指南。

*FLAG® is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany and ANTI-FLAG is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC.


保存温度

自收到之日起,-20℃下可稳定储存6个月。较低的温度会导致冻结,并会永久损坏磁珠。


验证数据

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

Figure 1: Schematic of SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

The DYKDDDDK Tag Panel contains two nucleosomes – one has an H3 tail fusion to a 3xDYKDDDDK Tag epitope and one is an unmodified control. Both octamers are wrapped with two uniquely barcoded DNA templates (A and B). Each 250 bp DNA template contains a 123 bp 601 nucleosome positioning sequence (gray) [1], a unique 22 bp DNA-barcode (white; 4 barcodes total), and a 5’ biotin-TEG. The 5’ and 3’ linkers (blue) are compatible with cleavage by pAG-MNase (EpiCypher 14-104815-1016) during CUT&RUN. The nucleosomes are individually pre-conjugated to paramagnetic beads and pooled for convenient use.

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

Figure 2: SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel provides an in-assay control for CUT&RUN 

reactions targeting FLAG-tagged proteins

CUT&RUN was performed as described in Figure 5. CUT&RUN sequencing reads were aligned to the unique DNA barcodes corresponding to each nucleosome in the SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel. Data are expressed as a percent relative to on-target recovery (DYKDDDDK Tag set to 100%) or total counts (IgG). IgG antibody results demonstrate equal loading of unmodified and epitope nucleosomes in the panel. DYKDDDDK Tag antibody results show selective enrichment of the DYKDDDDK Tag spike-in nucleosomes, validating all CUT&RUN steps, including DYKDDDDK antibody binding, pAG-MNase cleavage, and wash conditions.

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

Table 1: Recommended SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel Spike-in dilution for CUT&RUN reactions of varying starting cell number.

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

Figure 3: DNA gel data

Nucleosomes in the SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel were resolved via native PAGE and stained with ethidium bromide to confirm intact nucleosome assembly. Lane 1: Free 250 bp DNA used in nucleosome assembly (100 ng). Lane 2: Intact nucleosomes (400 ng).

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

Figure 4: Protein gel data

Coomassie stained SDS-PAGE gel of the nucleosome containing a 3xDYKDDDDK-H3 fusion (1 μg) in the SNAP-CUTANA DYKDDDDK Tag Panel demonstrates the purity of histones in the preparation. Sizes of molecular weight markers and positions of the core histones (H2A, H2B, 3xDYKDDDDK-H3, and H4) are indicated.

EpiCypher新品推荐——SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

Figure 5: CUT&RUN methods

CUT&RUN was performed on 500k MDA-MB-231 native cells stably expressing 3xFLAG-tagged GATA3 [1]** using the CUTANA™ ChIC/CUT&RUN Kit v3 (EpiCypher 14-1048). SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel was added just prior to the addition of either DYKDDDDK Tag (0.05 μg; EpiCypher 13-2031) or IgG negative control (0.5 μg; EpiCypher 13-0042) antibodies. Library preparation was performed with 5 ng of DNA (or the total amount recovered if less than 5 ng) using the CUTANA™ CUT&RUN Library Prep Kit (EpiCypher 14-1001/14-1002). Libraries were run on an Illumina NextSeq2000 with paired-end sequencing (2×50 bp). Data were aligned to the hg19 genome using Bowtie2. Data were filtered to remove duplicates, multi-aligned reads, and ENCODE DAC Exclusion List regions.

**Thanks to Dr. Takaku (UND) for 3xFLAG-GATA3-3xHA MDA-MB-231 cells.

订购详情

货号

产品名称

规格

19-5001

SNAP-CUTANA™ DYKDDDDK Tag Panel

50 Reactions


参考文献

[1] Lowary & Widom J. Mol. Biol. (1998). PMID: 9514715

[2] Takaku et al. Genome Biol. (2016). PMID: 26922637


 

如需了解更多详细信息或相关产品,

请联系EpiCypher中国代理商-上海金畔生物 

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶 #M2622L 100,000 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                              收藏

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                                  #M2622L 100,000 units Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                                  #M2622L 100,000 units Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                                  #M2622L 100,000 units

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存
武汉库存

#M2622L
100,000 units
3,429.00

#M2622S
20,000 units
859.00

Download:       

  • isoschizomers     |
  • compatible ends     | 
  • single letter code

特性

  •  Hi-T4 耐热 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶经基因工程改造过的酶,与 T4 DNA 连接酶相比,改善了热稳定性
  • 不仅能够连接平末端和粘性末端,还能修复双链 DNA 和 DNA/RNA 杂交链的单链切刻
  • 随酶提供 T4 DNA 连接酶缓冲液和 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液

概述

 Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶的耐热变体,该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´ – 磷酸末端和 3´ – 羟基末端形成磷酸二酯键,经过改造其作用温度高于野生型 T4 DNA 连接酶。Hi-T4 耐热 DNA 连接酶可在温度高达 50ºC 时进行平末端和粘性末端的连接以及修复双链 DNA 、RNA 或
DNA / RNA 杂交链的单链切刻。

图1:Hi-T4 耐热 DNA 连接酶比普通 T4 DNA 连接酶热稳定性更好

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                                  #M2622L 100,000 units

45℃ 温度下,将 400 单位 T4 DNA 连接酶(NEB #M0202)或 Hi-T4 耐热 DNA
连接酶(NEB #M2622)与 1X T4 DNA 连接酶缓冲液,在无底物情况下预加热
如图所示时间后,所剩酶活进行如下检测:添加 0.12 µM 荧光标记的 HindIII
粘性末端片段 37℃ 温育 15 分钟,连接产物用毛细管电泳检测。
T4 DNA 连接酶在 45℃ 条件下,逐渐失去活性,而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶
即使在 45℃ 温育 72小时,对粘性末端底物仍有 100% 的活性。
 
图2:Hi-T4 耐热 DNA 连接酶比普通 T4 DNA 连接酶更耐热循环
 
Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                                  #M2622L 100,000 units
在 1X T4 DNA连接酶缓冲液中,分别用 1000 单位的 T4 DNA 连接酶(NEB#
M0202)或 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶(NEB# M2622)与 1 µg pBR322 进行循环
温育。循环温度设置为:42℃(A)或 50℃(B) 5 分钟,16℃ 5 分钟,
循环数如图显示:0、15、30、45、60。所剩酶活检测如下:25℃ 条件下,连
接荧光标记的 HindIII 粘性末端片段 10 分钟,连接产物用毛细管电泳检测。
相比于循环开始前的所剩酶活见图。
A. T4 DNA 连接酶在 16℃ 和 42℃ 循环温育时逐渐失去活性(金线,A),然
而 Hi-T4 耐热 DNA连接酶在 16℃ 和 42℃ 循环温育 60 次后仍保持活性
(橙色线,A)。
B. T4 DNA 连接酶在 16℃ 和 50℃ 循环温育 15 次后(金线,B)就完全失
活,然而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶在 16℃ 和 50℃ 循环温育 60 次(橙色
线,B)后仍保留 60% 左右的活性。
来源
重组表达纯化。
 
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液(50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP,(pH 7.5 @ 25℃)),25℃ 温育。
 
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
 
质保声明
Hi-T4 耐热 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。
 
单位定义(粘性末端活性单位)
1 单位指在 20 µl 反应体系中,25℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的 6 µg经 HindIII 消化的λDNA 连接所需的酶量。
 
浓度
400,000 units/ml。
 
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,Hi-T4 耐热 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液稀释(稀释缓冲液A,
NEB #B8001S),-20℃ 保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、连接温度
连接粘性末端(1 x T4 DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 DNA 连接酶,25 – 50ºC 温育 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端(1 x StickTogether DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,25 – 50ºC 温育 10 分钟。不要用加热来终止反应,因为
StickTogether DNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
 
参考文献
该产品的特性和应用的参考文献,请联系我们。
 

 

 

PeproGrow™ hESC培养基常见问题

PeproGrow™ hESC培养基常见问题

1. PeproGrow™ hESC的配方是什么?

PeproGrowTM hESC培养基是PeproTech与美国罗格斯大学干细胞培训中心合作研发的专有配方,不含血清和酚红,化学成分明确。每个PeproGrow™ hESC培养基试剂盒中包含一瓶基础培养基和一管单独的PeproTech重组生长因子冻干粉。

2. 如何储存PeproGrow™ hESC培养基?

基础培养基避光2°C – 8°C最长保存6个月,生长因子冻干粉组分2°C -8°C可保存6个月,-20°C至-80°C则可保存长达5年。

3. PeproGrow™ hESC培养基应该如何使用?

生长因子冻干粉在开盖前需离心,然后根据试剂盒的规格不同用100 µl或500 µl细胞培养级无菌水重悬。如果两周内能用完,则将全部的已重悬生长因子组分无菌操作加入基础培养基中,通过旋转或吹打充分混匀。如果两周内用不完,则需无菌操作取所需体积的基础培养基至一个无菌的聚碳酸酯(PC)瓶或锥形底聚丙烯(PP)管中,然后按比例加入已重悬的生长因子组分,并通过旋转充分混匀。如果整个过程均为无菌操作,配制完成后无需再次过滤除菌。在瓶子标签上标注配制时间及新的有效期(混合后2周),避光保存于2°C – 8°C。细胞换液前,仅取当次所需量的培养基,复温后使用。

4. 从我目前使用的培养基更换为PeproGrow™ hESC培养基时必须进行适应培养吗?

在两种均含胰岛素的培养基间切换不必进行适应培养,而当从含胰岛素的培养基更换为不含胰岛素的培养基时则可能需要适应培养。是否需要适应培养液也与细胞类型有关。当快速方案(无适应培养)的效果不尽如人意时,额外的适应培养(短期或长期的)可能就有必要了。如果短期的适应培养不奏效时,可使用长期的适应培养,同时逐步提高新培养基的比例,如按100:0,80:20,60:40,20:80和0:100分步进行。请阅读PeproGrow™ hESC培养基使用手册,以获取更多信息。

5. 适应培养过程中出现分化正常吗?

在快速方案和适应培养中出现一些分化都是正常的。您可以刮除分化的克隆,或者挑取未分化的克隆至一个新的包被好的细胞培养皿上继续培养。请阅读PeproGrow™ hESC培养基使用手册,以获取更多信息。

6. 更换为PeproGrow™ hESC培养基后,我的细胞会发生改变吗?

尽管无法精确地预估细胞可能发生的变化,但在使用PeproGrowTM hESC培养基时克隆形态在可能会发生一些改变,比如细胞变得扁平等,但未观察到过细胞多能性和细胞表型的变化。在适应培养过程中,细胞可能会变得更加健壮,更能耐受传代所带来的损伤。请阅读PeproGrowTM hESC培养基使用手册,以获取更多信息。如果使用实验室常规的方法培养未发现细胞改变,则无需改变培养方法。

7. 细胞应在包被的还是未包被的培养器皿中培养?

不建议在未包被的塑料器皿中培养细胞。在适应培养的初始阶段,推荐用Corning Matrigel™包板,后面可使用其它合适的细胞外基质(ECM)。PeproTech为自己的干细胞培养基特制了一款包板试剂,即无动物成分的重组人Vitronectin(玻连蛋白)基质和缓冲液试剂盒(产品编号:AF-VMB-220)。该试剂可直接包板使用,也可与细胞预混后加入培养器皿。

8. 酶消化法传代后,细胞为什么贴壁不好?

原因最有可能是消化过度了。然而,消化后如仍有贴壁的克隆,可继续常规换液。4-6天后,有些细胞会茁壮长出,从其中挑选出2-4个克隆即可将您的培养维持下去。为避免过度消化,您可使用非酶消化法传代。注意:用无动物成分的重组人Vitronectin基质包板时,不能用酶消化法传代,此时应用仅含有PBS, HEPES和EDTA的等渗细胞传代/非酶法消化液(产品编号:CPD-125)来传代。

9. 酶消化传代后如果细胞贴壁不好,有什么改善的方法吗?

研究发现,添加2-10 µM(2 µM最佳)的Y-27632或ROCK抑制剂,可显著改善酶消化法(使用Dispase(分散酶)或Accutase™)传代后细胞的存活及贴壁情况。而过量的Y-27632除能引起可逆的形态学改变外,还可导致神经分化。

10. 关于细胞传代,还有其它建议吗?

下面是我们的一些建议,您也可以参阅PeproGrow™ hESC培养基使用手册。

确定合适的消化时间是细胞传代过程中至关重要的一步。使用Dispase酶消化时一定要避免过度消化,因为过度消化会造成克隆不贴壁或贴壁时发生自身折叠。

培养5-7天后,克隆很可能会长至足够大,此时可以传代。

出现一些细胞死亡是正常的。用Dispase酶法传代后,一定比例的细胞会不贴壁。但如果活细胞比例低于50%,则说明消化过头了。PBS/EDTA法传代则更为温和,正确操作时会有很好的克隆回收率。

11. 对于细胞传代的时机,你们还有什么建议?

传代时机很关键,如果传代过早,细胞会因克隆过小而铺板能力较差,且传代后不易存活。避免胶原酶的过度消化也极为重要。我们推荐使用Disapase酶或PBS/EDTA法,均是消化5分钟最佳,但在消化3分钟时需镜下观察细胞状态,以确定是否用满5分钟。

12. 细胞密度对克隆生长有什么影响?

细胞过疏或过密,均易引起自身分化。如传代比例过高,细胞将无足够的自分泌因子来提高其活力,许多细胞会死亡和/或分化,因此我们建议培养皿中的细胞在接近融合时传代。使用Dispase酶法传代时,可尝试1:6、1:12或1:18的传代比;而用PBS/EDTA法传代时,则可尝试1:6、1:12、1:18或1:24的传代比。如果需要,可进一步提高传代比。当使用Dispase酶法且细胞接种密度较低时,我们建议在传代时添加Y27632,如采用PBS/EDTA法,则无需添加。

13. 细胞铺板时需注意些什么?

我们建议沿着孔的边缘(仅针对六孔板)接种细胞,并轻轻地来回晃动培养板,使细胞混合均匀。如果使用其它规格的培养器皿,加细胞时可通过移动枪头来分散细胞。

14. 对于换液,有什么特别的建议吗?

每天换液。特殊情况下,可通过一次“双倍换液”来度过周末。

15. 我能用以上推荐的基质以外的基质来包被细胞培养器皿吗?

可以的。我们测试过几种其它的包板基质,包括Laminin/Entactin(BD™),重组人Vitronectin(PeproTech;产品编号为140-09和AF-140-09)和Synthemax II® (Corning)。在标准的细胞培养塑料器皿上,以Laminin/Entactin作为包被基质,细胞生长状态可以达到与Corning Matrigel™近乎一致的水平。而以人Vitronectin和Synthemax II®作为包被基质时,则推荐使用CellBIND®或其它同等类型的细胞培养塑料器皿,才可达到最佳的包被效果。克隆的延展性和贴壁能力弱时有发生,此时需添加Y-27632处理一段时间。

详情请咨询PeproTech代理商–上海金畔生物


Plasmocure™——强力清除具有Plasmocin™抗性的支原体

Plasmocure™——强力清除具有Plasmocin™抗性的支原体

Plasmocure™——强力清除具有Plasmocin™抗性的支原体
 
据报道在极少数情况下,有些支原体对Plasmocin™ 具有抗性。基于此,InvivoGen又开发了第二款支原体抗生素Plasmocure™。Plasmocure™采用不同于Plasmocin™作用机制的两种抗生素来杀灭支原体,处理两周时间即可彻底清除这些顽固支原体。在处理过程中有轻度的细胞毒性,但支原体清除后细胞系可完全恢复。Plasmocure™推荐使用浓度为50 mg/ml。

 

产品名称 规格 产品编号
Plasmocure™ 100 mg (1 x 1 ml) ant-pc

 
其他相关产品推荐

Plasmocin——支原体预防与去除利器
Primocin™——原代细胞抗生素
Normocin™——细菌、真菌、支原体多效抗生素
Fungin™——真菌特异性抗生素


更多产品信息请咨询上海金畔生物,

NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒 – 含片段化酶 #E7430L 96 次反应-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA

NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒 – 含片段化酶                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存
武汉库存

#E7430L
96 次反应
28,189.00

#E7430S
24 次反应
7,449.00

Download:       

  • isoschizomers     |
  • compatible ends     | 
  • single letter code

相关产品

NEBNext® Ultra II DNA PCR-Free 文库制备试剂盒
NEBNext® Ultra II DNA PCR-free 文库制备试剂盒(含纯化磁珠)
NEBNext® Ultra II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒 – 含片段化酶(含纯化磁珠)

产品特点

·起始量范围广:50 ng 至 500 ng 的完整 DNA 均可制备高质量文库,且无需扩增步骤

·不同 DNA 起始量或 GC 含量的样本,都可使用同样的操作流程达到稳定可靠的片段化效果
·包含 NEBNext FS(片段化系统)酶法片段化试剂,使用同一种酶混合物即可完成 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾三个步骤
·更高的文库产量,获得更多有用信息
·提高文库均一性,进而提高测序质量
·不同类型的起始样本,均可制备 PCR-free 文库
·通过优化的 PCR-free 实验流程,减少手动操作时间,并可与自动化兼容
·配合使用 NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1(Unique 双端 Index 引物,UMI 接头,适用于 DNA)(NEB #E7395)或其它具有3 T 突出的适用于 Illumina 平台的接头
·也可提供含有样品纯化磁珠的 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-Free 文库制备试剂盒(含纯化磁珠)
 

产品概述

 没有偏差!基于简化可靠的 Ultra II FS 流程,适用于 Illumina® 测序平台的本试剂盒可为 DNA-seq 提供无需扩增的文库制备流程。即使 DNA 起始量低至 50 ng,也可获得高质量、高产量的文库,而无需担忧 PCR 偏差。

 
NEBNext Ultra II FS DNA PCR-Free 文库制备试剂盒包含不同起始量、完整的 DNA 文库制备所需的所有酶和缓冲液,以便在 Illumina 平台上进行二代测序,且不需要扩增步骤。快速、用户友好的流程包含可靠的酶法 DNA 片段化过程,仅需最少的手动操作时间,在无需 PCR 的情况下,就可获得优异的文库产量和 GC 覆盖度。
 
注意:如果您的起始 DNA 已被打断,我们推荐您使用 NEBNext® UltraII DNA PCR-free 文库制备试剂盒(NEB #E7410)。
 
产品描述: 
NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒 - 含片段化酶                               #E7430L 96 次反应
图1:使用 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒,能获得更高的文库产量
 
A.以人 NA19240 基因组 DNA(Coriell Institute)为起始样本,使用 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒和 Illumina PCR-free 文库制备试剂盒分别制备 PCR-free 文库,350 bp 插入片段作为筛选标准。
B.分别使用基于酶法片段化的 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒和 Roche Sequencing Kapa HyperPlus 文库制备试剂盒,制备 150 – 200 bp 插入片段的 PCR-free 的文库,不进行片段筛选。根据生产商推荐方法,NEBNext 和 Kapa 试剂盒分别使用了 NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1(Unique 双端 Index 引物,UMI 接头,适用于 DNA)和 Kapa Dual-Indexed Adaptors。
NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒 - 含片段化酶                               #E7430L 96 次反应
 
图2:使用 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒,实现人类基因组均一覆盖。相较于 Illumina DNA PCR-free 文库制备试剂盒,NEBNext Ultra II FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒可实现更高的基因组覆盖度。根据生产商推荐方法,以 250 ng NA19240 基因组 DNA 为起始样本,分别由 2 位实验员制备文库,使用 NovaSeq 6000 S4 v1.5 flow cell(PE 2 x 150 bp)测序。Reads 去接头(fastp 0.20.0)后比对至端粒到端粒 chm13 参考基因组(draft 1,bwa-mem 0.7.17),并标记重复(samblaster 0.1.24)。从每个 bam 中随机抽取 2.8 B Reads(sambamba view -s 0.6.8)。使用 mosdepth(v0.3.1,-F 772)评估过滤水平和初级覆盖度,并绘制常染色体或线粒体基因组图。图中标示出了预期覆盖度(num_reads*read length/genome size)。两位实验员在使用 Illumina PCR-free 文库制备试剂盒时覆盖度存在显著差异,而使用 FS DNA PCR-free 文库制备试剂盒时不存在该问题,结果非常一致。
 

揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片

揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片

在免疫组化检测过程中,许多样本组织会产生可通过各种波长滤光片的组织内源性自发荧光,干扰抗体标记的目的蛋白荧光的观察,甚至导致实验失败。为了解决免疫组化实验中的自发荧光,VectorLabs公司专门开发了一款Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit试剂盒,该产品旨在去除组织切片中由于醛固定、红细胞以及胶原蛋白/弹性蛋白结构造成的自发荧光。该试剂使用方便,无需稀释操作,为即用型试剂。 该试剂盒中含有防自发荧光效果excellent的VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 封片剂(含或不含DAPI两种)。客户无需单独购买封片剂,经济、实用。

注意:该试剂盒对脂褐素造成的组织自发荧光无效。

● 试剂盒组成: 

a. Vector®TrueVIEW™ Reagent A 5ml b. Vector®TrueVIEW™ Reagent B 5ml c. Vector®TrueVIEW™ Reagent C 5ml d. VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 2ml e. VECTASHIELD Vibrance Antifade  Mounting Media with DAPI 2ml

其中,货号SP-8400包含a,b,c,d四个组分;货号SP-8500包含a,b,c,e四个组分

● 产品使用方法:

揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片  将ReagentA、B、C以1:1:1的比例混合。(注意混合顺序,先将A和B以1:1比例混合10s,再加入C,混匀10s) 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片  将混好后的TrueView试剂滴加到组织样本切片上,将样本完全覆盖,孵育2-5min 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片  使用PBS缓冲液洗片5次,除去多余缓冲液,VECTASHIELD Vibrance Media封片后观察 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 

● 产品特征 

A 显著降低背景染色并保留特异性抗原染色; B 提高信噪比; C 产品稳定,储存在滴瓶中,使用方便; D 操作简单,快速;整个染色过程仅需2-5min; E 为使用者提供清晰、明确、真实的染色结果; F 适用于多种荧光染料的自发荧光去除,包括Alexa488,Alexa 594,DyLight 488,DyLight 594,FITC,Cyanine 5和GFP;

G SP-8500试剂盒中的封片剂中DAPI浓度较高,可对细胞核进行清晰的染色。

● 产品对自发荧光淬灭效果:

◆ 右图为经Vector®TrueVIEW™kit处理后,人肾脏组织切片中自发荧光淬灭的百分比与处理时间之间的关系。 ◆ Note:2分钟内即可达到最大淬灭效果。 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 


● 产品应用举例:  

> 案例一

未经任何处理 使用Vector®TrueVIEW™处理
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片
◆ 上图为人脾脏组织染色结果:使用VectaFluor TM Duet试剂盒(DK-8818)检测的mouse anti-CD20(red)和rabbit anti-Ki67(green)对人脾组织切片的染色。 ◆ 左图为未经任何处理的染色结果, ◆ 右图为使用TrueVIEW™Autofluorescence Quenching试剂盒染色结果。于未经处理的染色结果相比,经TrueVIEW™Autofluorescence Quenching试剂盒处理后,自发荧光显著减少。


> 案例二

揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片  ◆ A-D图为人肾脏切片(石蜡切片)染色结果,实验中使用anti-AE1 /AE3抗体对角蛋白进行染色(绿色)。◆ A图未经处理, ◆ B-D图经TrueVIEW™Quencher Kit处理。自发荧光明显减弱。延长曝光时间,阳性信号强度也随之增强。
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片  揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片


> 案例三

未经任何处理 使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI处理

揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片

揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片
◆ 上图为人胰腺组织染色结果:绿色为insulin的染色。
◆ 左图为未经任何处理的染色结果,
◆ 右图为使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI(SP-8500)试剂盒染色结果。与未经处理的染色结果相比,经该试剂盒处理后,自发荧光显著减少,核染色显著增强。


> 案例四

未经处理(内源性自发荧光)   经TrueVIEW™Quencher Kit处理
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片
Company A Company B Company C
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片
Copper Sulfate Solution Sodium Borohydride Sudan Black B
揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片 揭秘:防止组织自发荧光“轻骑兵”——Vector True VIEW™ Kit快速获得高质量图片


● 产品订购信息 Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit

产品 货号 规格 染色切片数
Vector® True VIEW™
Autofluorescence Quenching Kit
SP-8400 15ml 100-150
Vector® True VIEW™
Autofluorescence Quenching Kit
SP-8500 15ml 100-150
VECTOR TrueVIEW  
Autofluorescence Quenching Kit (3ml)
SP-8403 3ml ~30
VECTASHIELD® HardSet™
Antifade Mounting Medium
H-1400 10ml 100-150
VECTASHIELD® HardSet™
with DPI Antifade Mounting Medium
H-1500 10ml 100-150

详情请咨询 Vectorlabs 中国代理- 上海金畔生物科技